24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1374  |  回复: 6

泽夕

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤酵母电转请教 已有3人参与

毕赤酵母用80ul的GS115感受态和线性化的质粒电转后,加入1ml YPD和山梨醇的混合液,静置2h,涂3个MD平板,3天后每个平板长出超过50个菌,都是白白的,不是很小。感受态是新鲜做的。
别人看到后说他们每次转完平板上只长几个菌落,不会长这么多。
请教做过酵母电转的同仁,长这么多是不是正常的,有什么检测的方法?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2013-02-27 09:23:39
为什么要和别人一样?只要长出来是你的不就好了?
转化效率受到外源DNA量,酵母浓度的影响。
只要一步步按照protocol坐下来肯定没问题,自信点,都是很成熟的东西
我能想到的检测方法就是提基因组PCR,
阳光总在风雨后
2楼2013-02-26 22:00:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泽夕

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tanche163 at 2013-02-26 22:00:18
为什么要和别人一样?只要长出来是你的不就好了?
转化效率受到外源DNA量,酵母浓度的影响。
只要一步步按照protocol坐下来肯定没问题,自信点,都是很成熟的东西
我能想到的检测方法就是提基因组PCR,

啊,都要疯了,破菌之后PCR没P出来,今天挑了6个做了表达试一下。就想知道别人的是不是也会长这么多,他们一看我的长这些,就说不靠谱。
3楼2013-02-26 22:24:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanche163

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 泽夕 at 2013-02-26 22:24:03
啊,都要疯了,破菌之后PCR没P出来,今天挑了6个做了表达试一下。就想知道别人的是不是也会长这么多,他们一看我的长这些,就说不靠谱。...

P都没P那说明质粒没进去,更不用谈表达了啊,找找原因,看看抗性浓度对不对,质粒对不对,菌对不对,
奇怪的是长出来的是你的酵母吗
阳光总在风雨后
4楼2013-02-27 09:20:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泽夕

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tanche163 at 2013-02-27 09:20:18
P都没P那说明质粒没进去,更不用谈表达了啊,找找原因,看看抗性浓度对不对,质粒对不对,菌对不对,
奇怪的是长出来的是你的酵母吗...

长出来的是正常的酵母的形态
5楼2013-02-27 09:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix211

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖 2013-05-10 16:29:43
以前也做过这个,没长楼主这么多,但是也没有说只有几个这么夸张。。。二十来个吧。。。
这个转化效率跟挺多因素有关系,质粒浓度啊,感受态啊,电击条件啊什么的,所以楼主也不要老担心自己的板长了太多个,验证菌落就是了。
先做PCR的验证呗。
6楼2013-02-27 13:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosmoslight

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖 2013-05-10 16:29:50
不要在乎长的多少,要在乎的是质粒有没有
如果有质粒,酵母又长的多,说明你水平很高
7楼2013-05-10 09:10:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 泽夕 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 急需审稿人!!! +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +7 随心所欲☆ 2026-04-15 8/400 2026-04-21 08:22 by Equinoxhua
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 期刊推荐 +3 材料研究生 2026-04-15 5/250 2026-04-20 16:02 by 豆豆7758
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +4 yexuqing 2026-04-19 4/200 2026-04-20 14:47 by brantleo
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
信息提示
请填处理意见