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毕赤酵母电转请教
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泽夕
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毕赤酵母电转请教
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毕赤酵母用80ul的GS115感受态和线性化的质粒电转后,加入1ml YPD和山梨醇的混合液,静置2h,涂3个MD平板,3天后每个平板长出超过50个菌,都是白白的,不是很小。感受态是新鲜做的。
别人看到后说他们每次转完平板上只长几个菌落,不会长这么多。
请教做过酵母电转的同仁,长这么多是不是正常的,有什么检测的方法?
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1楼
2013-02-26 17:25:53
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泽夕
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2楼
:
Originally posted by
tanche163
at 2013-02-26 22:00:18
为什么要和别人一样?只要长出来是你的不就好了?
转化效率受到外源DNA量,酵母浓度的影响。
只要一步步按照protocol坐下来肯定没问题,自信点,都是很成熟的东西
我能想到的检测方法就是提基因组PCR,
啊,都要疯了,破菌之后PCR没P出来,今天挑了6个做了表达试一下。就想知道别人的是不是也会长这么多,他们一看我的长这些,就说不靠谱。
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3楼
2013-02-26 22:24:03
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tanche163
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2013-02-27 09:23:39
为什么要和别人一样?只要长出来是你的不就好了?
转化效率受到外源DNA量,酵母浓度的影响。
只要一步步按照protocol坐下来肯定没问题,自信点,都是很成熟的东西
我能想到的检测方法就是提基因组PCR,
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阳光总在风雨后
2楼
2013-02-26 22:00:18
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3楼
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泽夕
at 2013-02-26 22:24:03
啊,都要疯了,破菌之后PCR没P出来,今天挑了6个做了表达试一下。就想知道别人的是不是也会长这么多,他们一看我的长这些,就说不靠谱。...
P都没P那说明质粒没进去,更不用谈表达了啊,找找原因,看看抗性浓度对不对,质粒对不对,菌对不对,
奇怪的是长出来的是你的酵母吗
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阳光总在风雨后
4楼
2013-02-27 09:20:18
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4楼
:
Originally posted by
tanche163
at 2013-02-27 09:20:18
P都没P那说明质粒没进去,更不用谈表达了啊,找找原因,看看抗性浓度对不对,质粒对不对,菌对不对,
奇怪的是长出来的是你的酵母吗...
长出来的是正常的酵母的形态
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5楼
2013-02-27 09:45:38
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