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bubble1220银虫 (小有名气)
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大家帮我看看质粒肿木了？
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我的质粒大小为2800bp，pUC18复制位点 第一次提取质粒并单酶切验证结果正确，图是这样的 1 质粒 2 单酶切，结果看起来是正确的，下面那条带认为是没有酶切完全的 质粒保存于-20度，2天后再拿出来酶切，结果图是这样的 3 质粒 没什么变成弥散的了？而且带型也和上次不一样了 4 单酶切 结果和上一次一样，但是这回下面那条带我就不认为是没切开的了，因为质粒上也有一条，到底下面那条带是什么啊？  未命名-2.jpg |
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bubble1220: 金币+4, ★有帮助 2013-02-28 08:36:02
| 个人感觉可能是质粒不纯，本身两条带，离的比较近，浓度大的时候不容易被看出来，所以234会在同一个位置留有条带，特别是34，貌似条带的深浅都是一样的。至于为啥弥散，可能是你第一次做的时候，不小心把酶飞进去了，从你的3位置的质粒高度与4位置的酶切高度相当可以推测，以上仅是个人推测。 |
7楼2013-02-26 16:37:51
tianchunying
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建议你对质粒进行定量。一般鉴定酶切，需要的质粒量一般在500ng--1ug，就足够了，如果需要回收（尤其是回收小片段）时，则一般需要增加酶切的DNA量。 而酶切时，所需要的限制性内切酶的用量，很多人都是凭经验，但事实上，不同的酶，其活性单位定义都不一致。因而，凭经验，很容易出现酶切不完全的情况，我建议你用Doulbe digestion disigner 软件进行双酶切设计，该软件可以根据你酶切的DNA量以及你的限制性内切酶的供应商来精确计算酶切时所需要的酶量，免除优化酶切反应的烦劳。 我们公司购买其使用权，很方便。据说现在还可以免费试用，你可以试试。我在小木虫上推荐过，你应该可以搜到其链接。 祝好运。 |
8楼2013-02-26 22:18:09
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