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bubble1220

银虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我看看质粒肿木了?

我的质粒大小为2800bp,pUC18复制位点
第一次提取质粒并单酶切验证结果正确,图是这样的
1 质粒
2 单酶切,结果看起来是正确的,下面那条带认为是没有酶切完全的
质粒保存于-20度,2天后再拿出来酶切,结果图是这样的
3 质粒  没什么变成弥散的了?而且带型也和上次不一样了
4 单酶切  结果和上一次一样,但是这回下面那条带我就不认为是没切开的了,因为质粒上也有一条,到底下面那条带是什么啊?

未命名-2.jpg
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linzshit

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题 2013-02-26 18:12:23
amisking: 回帖置顶 2013-02-26 18:12:24
bubble1220: 金币+4, 有帮助 2013-02-28 08:36:02
个人感觉可能是质粒不纯,本身两条带,离的比较近,浓度大的时候不容易被看出来,所以234会在同一个位置留有条带,特别是34,貌似条带的深浅都是一样的。至于为啥弥散,可能是你第一次做的时候,不小心把酶飞进去了,从你的3位置的质粒高度与4位置的酶切高度相当可以推测,以上仅是个人推测。
7楼2013-02-26 16:37:51
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tianchunying

木虫 (正式写手)

★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-02-26 18:12:16
从图上看 你的胶应该是没有问题 问题可能出在你酶切那步  你看你2和4两次的结果都不一样 而且一般酶切都能切完全的  建议你加大内切酶的量  延长酶切时间
天行健,君子以自强不息;地势坤,君子以厚德载物。
2楼2013-02-26 09:32:12
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tianchunying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
bubble1220: 金币+3, 有帮助 2013-02-28 08:36:15
从图上看 你的胶应该是没有问题 问题可能出在你酶切那步  你看你2和4两次的结果都不一样 而且一般酶切都能切完全的  建议你加大内切酶的量  延长酶切时间
天行健,君子以自强不息;地势坤,君子以厚德载物。
3楼2013-02-26 09:32:28
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bubble1220

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tianchunying at 2013-02-26 09:32:12
从图上看 你的胶应该是没有问题 问题可能出在你酶切那步  你看你2和4两次的结果都不一样 而且一般酶切都能切完全的  建议你加大内切酶的量  延长酶切时间

谢谢,可是我怎么觉得2和4是一样的呢?
我的酶切体系中酶量为十分之一,酶切时间3h,以前都没有问题啊
4楼2013-02-26 09:34:32
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