| 查看: 994 | 回复: 10 | |||
bubble1220银虫 (小有名气)
|
[求助]
大家帮我看看质粒肿木了？
|
||
|
我的质粒大小为2800bp，pUC18复制位点 第一次提取质粒并单酶切验证结果正确，图是这样的 1 质粒 2 单酶切，结果看起来是正确的，下面那条带认为是没有酶切完全的 质粒保存于-20度，2天后再拿出来酶切，结果图是这样的 3 质粒 没什么变成弥散的了？而且带型也和上次不一样了 4 单酶切 结果和上一次一样，但是这回下面那条带我就不认为是没切开的了，因为质粒上也有一条，到底下面那条带是什么啊？  未命名-2.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有274人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大家帮我看看，我的CV怎么做成这样，太诡异了
已经有17人回复
- 大家帮我看看是否值得resubmission
已经有58人回复
- 请大家帮我看看摘要中的这句话怎么理解
已经有7人回复
- 大家帮我看看这句话对不对？
已经有2人回复
- 大家帮我看看编辑这话是啥意思？
已经有14人回复
- 质粒提取后出现两条亮度相同的带，谁帮我看一下。。。。。。。
已经有6人回复
- 大家帮我看看哪个单位更有发展前途
已经有13人回复
- 求助：重组质粒酶切问题！请大家帮我解决一下，急！
已经有7人回复
- 请帮我看看提取质粒的图是出了什么问题
已经有19人回复
- 第一篇SCI，大家帮我看看如何回复
已经有11人回复
- 大家帮我看看这是什么意思？
已经有11人回复
- 大家帮我看看清华这个导师啥意思？
已经有14人回复
- 大家帮我看看是几A几B几C
已经有5人回复
- 大家帮我看看老板什么意思
已经有15人回复
- 请大家帮我看看我的电猫怎么回事
已经有4人回复
- 请大家帮我看看这段回复是什么意思？
已经有5人回复
- 请大家帮我看看，这个博后读还是不读？
已经有34人回复
- 大家帮我看看这个图怎么做啊
已经有9人回复
- 大家帮我看看这3个Offer选择问题
已经有55人回复
- 大家帮我看看cDNA图片对吗？
已经有5人回复
- 大家帮我看看这句话对吗。如果不对怎么改呢？
已经有7人回复
- 大家帮我看看评审意见，评审人给了我什么分数？
已经有12人回复
- 大家帮我看看，我应该去哪儿？
已经有21人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题 2013-02-26 18:12:23
amisking: 回帖置顶 2013-02-26 18:12:24
bubble1220: 金币+4, ★有帮助 2013-02-28 08:36:02
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题 2013-02-26 18:12:23
amisking: 回帖置顶 2013-02-26 18:12:24
bubble1220: 金币+4, ★有帮助 2013-02-28 08:36:02
| 个人感觉可能是质粒不纯，本身两条带，离的比较近，浓度大的时候不容易被看出来，所以234会在同一个位置留有条带，特别是34，貌似条带的深浅都是一样的。至于为啥弥散，可能是你第一次做的时候，不小心把酶飞进去了，从你的3位置的质粒高度与4位置的酶切高度相当可以推测，以上仅是个人推测。 |
7楼2013-02-26 16:37:51
tianchunying
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2534.1
- 散金: 145
- 红花: 3
- 帖子: 715
- 在线: 211.4小时
- 虫号: 2257529
- 注册: 2013-01-23
- 性别: GG
- 专业: 血小板异常及相关疾病
2楼2013-02-26 09:32:12
tianchunying
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2534.1
- 散金: 145
- 红花: 3
- 帖子: 715
- 在线: 211.4小时
- 虫号: 2257529
- 注册: 2013-01-23
- 性别: GG
- 专业: 血小板异常及相关疾病
3楼2013-02-26 09:32:28
bubble1220
银虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 683.9
- 红花: 1
- 帖子: 129
- 在线: 61.9小时
- 虫号: 1379298
- 注册: 2011-08-25
- 专业: 生物化学
4楼2013-02-26 09:34:32
tianchunying
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2534.1
- 散金: 145
- 红花: 3
- 帖子: 715
- 在线: 211.4小时
- 虫号: 2257529
- 注册: 2013-01-23
- 性别: GG
- 专业: 血小板异常及相关疾病
5楼2013-02-26 09:51:24
tianchunying
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2534.1
- 散金: 145
- 红花: 3
- 帖子: 715
- 在线: 211.4小时
- 虫号: 2257529
- 注册: 2013-01-23
- 性别: GG
- 专业: 血小板异常及相关疾病
6楼2013-02-26 09:53:48
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
建议你对质粒进行定量。一般鉴定酶切，需要的质粒量一般在500ng--1ug，就足够了，如果需要回收（尤其是回收小片段）时，则一般需要增加酶切的DNA量。 而酶切时，所需要的限制性内切酶的用量，很多人都是凭经验，但事实上，不同的酶，其活性单位定义都不一致。因而，凭经验，很容易出现酶切不完全的情况，我建议你用Doulbe digestion disigner 软件进行双酶切设计，该软件可以根据你酶切的DNA量以及你的限制性内切酶的供应商来精确计算酶切时所需要的酶量，免除优化酶切反应的烦劳。 我们公司购买其使用权，很方便。据说现在还可以免费试用，你可以试试。我在小木虫上推荐过，你应该可以搜到其链接。 祝好运。 |
8楼2013-02-26 22:18:09
bingdong05
银虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 173.6
- 散金: 174
- 帖子: 559
- 在线: 158.8小时
- 虫号: 281641
- 注册: 2006-09-23
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2013-02-27 09:21:31
|
本帖内容被屏蔽 |
10楼2013-02-28 08:56:16
6