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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮我看看质粒肿木了？
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bubble1220

银虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我看看质粒肿木了？

我的质粒大小为2800bp，pUC18复制位点
第一次提取质粒并单酶切验证结果正确，图是这样的
1 质粒
2 单酶切，结果看起来是正确的，下面那条带认为是没有酶切完全的
质粒保存于-20度，2天后再拿出来酶切，结果图是这样的
3 质粒  没什么变成弥散的了？而且带型也和上次不一样了
4 单酶切  结果和上一次一样，但是这回下面那条带我就不认为是没切开的了，因为质粒上也有一条，到底下面那条带是什么啊？

未命名-2.jpg
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1楼 2013-02-26 08:50:37
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bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bubble1220: 金币+3, ★有帮助 2013-02-28 08:34:21
一般酶切，20ul体系的话，酶加0.5就够了，当然具体还得看所用商品酶所含酶的单位，一般酶要稀释10倍以上，因为酶液里面所含有的甘油等成分会影响其活性，另外，楼主试试延长酶切时间
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9楼2013-02-27 09:21:31
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tianchunying

木虫 (正式写手)
★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-02-26 18:12:16
从图上看 你的胶应该是没有问题 问题可能出在你酶切那步  你看你2和4两次的结果都不一样 而且一般酶切都能切完全的  建议你加大内切酶的量  延长酶切时间
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天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。
2楼2013-02-26 09:32:12
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tianchunying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bubble1220: 金币+3, ★有帮助 2013-02-28 08:36:15
从图上看 你的胶应该是没有问题 问题可能出在你酶切那步  你看你2和4两次的结果都不一样 而且一般酶切都能切完全的  建议你加大内切酶的量  延长酶切时间
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天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。
3楼2013-02-26 09:32:28
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bubble1220

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tianchunying at 2013-02-26 09:32:12
从图上看 你的胶应该是没有问题 问题可能出在你酶切那步  你看你2和4两次的结果都不一样 而且一般酶切都能切完全的  建议你加大内切酶的量  延长酶切时间

谢谢，可是我怎么觉得2和4是一样的呢？
我的酶切体系中酶量为十分之一，酶切时间3h,以前都没有问题啊
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4楼2013-02-26 09:34:32
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