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bubble1220

银虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

[求助] 大家帮我看看质粒肿木了？

我的质粒大小为2800bp，pUC18复制位点
第一次提取质粒并单酶切验证结果正确，图是这样的
1 质粒
2 单酶切，结果看起来是正确的，下面那条带认为是没有酶切完全的
质粒保存于-20度，2天后再拿出来酶切，结果图是这样的
3 质粒没什么变成弥散的了？而且带型也和上次不一样了
4 单酶切结果和上一次一样，但是这回下面那条带我就不认为是没切开的了，因为质粒上也有一条，到底下面那条带是什么啊？

未命名-2.jpg

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1楼 2013-02-26 08:50:37

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酶切专家

金虫 (小有名气)

MolEPI: 2
应助: 96 (初中生)
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性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

建议你对质粒进行定量。一般鉴定酶切，需要的质粒量一般在500ng--1ug，就足够了，如果需要回收（尤其是回收小片段）时，则一般需要增加酶切的DNA量。
而酶切时，所需要的限制性内切酶的用量，很多人都是凭经验，但事实上，不同的酶，其活性单位定义都不一致。因而，凭经验，很容易出现酶切不完全的情况，我建议你用Doulbe digestion disigner 软件进行双酶切设计，该软件可以根据你酶切的DNA量以及你的限制性内切酶的供应商来精确计算酶切时所需要的酶量，免除优化酶切反应的烦劳。
我们公司购买其使用权，很方便。据说现在还可以免费试用，你可以试试。我在小木虫上推荐过，你应该可以搜到其链接。
祝好运。