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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] western问题求救！！！

western转膜后，100V,1h20min，转膜时，温度很高，听见周围的冰融化的声音，电流一开始就300mA，最后貌似升到1000多mA，也不知道是哪里出错了导致这么发热，转膜液最后变成黄色（见图），胶也变黄了，但膜上的marker很明显（见图），我用TBST洗了膜2次，每次5min，听说蛋白在高温下会降解，请问还有做下去的必要吗？那么出现这个是什么原因？

Camera360_20130204092605.jpg



Camera360_20130204092852-1.jpg
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1楼 2013-02-04 09:34:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-06 07:34:45
照片上感觉是挺夸张的。你可以用丽春红染一下膜看看。如果还可以就继续做。
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2楼2013-02-05 07:26:32
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-06 07:35:29
严重怀疑问题出在你的电泳槽身上，电流也太大了，会不会烧到什么东西了？
缓冲液颜色不正常，你洗槽的时候是不是直接把导电的部分一起弄到水里了？因为第一眼就有看到铁锈的赶脚……
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3楼2013-02-05 10:18:11
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-05 08:26:32
照片上感觉是挺夸张的。你可以用丽春红染一下膜看看。如果还可以就继续做。

做完了 还显色了 一张膜大概废了一半吧 没有全部废掉 底下的小蛋白能检测到 上面大蛋白貌似都降解了
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4楼2013-02-05 19:44:38
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-02-05 11:18:11
严重怀疑问题出在你的电泳槽身上，电流也太大了，会不会烧到什么东西了？
缓冲液颜色不正常，你洗槽的时候是不是直接把导电的部分一起弄到水里了？因为第一眼就有看到铁锈的赶脚……

洗槽的时候 那个一黑一红的转膜槽是直接放水龙头下冲的
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5楼2013-02-05 19:45:32
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晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-06 07:35:40
好恐怖啊！从没遇到这种情况，我电流最大也就250ma，两个半小时，转170KD左右的蛋白，你是多大的蛋白？怎么那么大电流，对仪器也不好啊！感觉都要短路了似的，温度这么高，大蛋白或许真的降解了。
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人有绝交，才有至交！
6楼2013-02-05 23:45:30
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snailtt

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
好恐怖，下回用横流300mA吧，这次的不行就算了，就算出了结果你敢用吗
另电转液全部倒掉重配看看
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7楼2013-02-06 17:46:48
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david0308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-02-14 05:42:15
楼主的转膜槽子检查过了么？怎么看描述像是电源短路……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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哈哈
8楼2013-02-14 01:09:05
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的湿转方法，80V，45min，即使是440KD的蛋白都能转过去。
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immunologyparasite
9楼2013-02-16 01:54:42
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neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1 check your transfer buffer(1X?);
2 check your machine.
3 from the marker ,it seems you can keep going.
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有朋自网上来不亦乐乎
10楼2013-02-17 19:44:31
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