24小时热门版块排行榜    

查看: 1644  |  回复: 13

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] western问题求救!!!

western转膜后,100V,1h20min,转膜时,温度很高,听见周围的冰融化的声音,电流一开始就300mA,最后貌似升到1000多mA,也不知道是哪里出错了导致这么发热,转膜液最后变成黄色(见图),胶也变黄了,但膜上的marker很明显(见图),我用TBST洗了膜2次,每次5min,听说蛋白在高温下会降解,请问还有做下去的必要吗?那么出现这个是什么原因?

Camera360_20130204092605.jpg



Camera360_20130204092852-1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-06 07:34:45
照片上感觉是挺夸张的。你可以用丽春红染一下膜看看。如果还可以就继续做。
2楼2013-02-05 07:26:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-06 07:35:29
严重怀疑问题出在你的电泳槽身上,电流也太大了,会不会烧到什么东西了?
缓冲液颜色不正常,你洗槽的时候是不是直接把导电的部分一起弄到水里了?因为第一眼就有看到铁锈的赶脚……
3楼2013-02-05 10:18:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-05 08:26:32
照片上感觉是挺夸张的。你可以用丽春红染一下膜看看。如果还可以就继续做。

做完了 还显色了 一张膜大概废了一半吧 没有全部废掉 底下的小蛋白能检测到 上面大蛋白貌似都降解了
4楼2013-02-05 19:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-02-05 11:18:11
严重怀疑问题出在你的电泳槽身上,电流也太大了,会不会烧到什么东西了?
缓冲液颜色不正常,你洗槽的时候是不是直接把导电的部分一起弄到水里了?因为第一眼就有看到铁锈的赶脚……

洗槽的时候 那个一黑一红的转膜槽是直接放水龙头下冲的
5楼2013-02-05 19:45:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-06 07:35:40
好恐怖啊!从没遇到这种情况,我电流最大也就250ma,两个半小时,转170KD左右的蛋白,你是多大的蛋白?怎么那么大电流,对仪器也不好啊!感觉都要短路了似的,温度这么高,大蛋白或许真的降解了。
人有绝交,才有至交!
6楼2013-02-05 23:45:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snailtt

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
好恐怖,下回用横流300mA吧,这次的不行就算了,就算出了结果你敢用吗
另电转液全部倒掉重配看看
7楼2013-02-06 17:46:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

david0308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-02-14 05:42:15
楼主的转膜槽子检查过了么?怎么看描述像是电源短路……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
哈哈
8楼2013-02-14 01:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的湿转方法,80V,45min,即使是440KD的蛋白都能转过去。
immunologyparasite
9楼2013-02-16 01:54:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1 check your transfer buffer(1X?);
2 check your machine.
3 from the marker ,it seems you can keep going.
有朋自网上来不亦乐乎
10楼2013-02-17 19:44:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 a83875785 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +12 且听虎啸 2026-08-07 15/750 2026-08-09 13:11 by GZUZM
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +3 布布和一二 2026-08-08 3/150 2026-08-08 18:15 by Lightingo
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 17:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见