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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR的退火温度
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duanepp

木虫 (小有名气)

[交流] 关于PCR的退火温度已有4人参与

小虫最近在做pcr的时候，发现按照我文献中的退火温度去做，什么都做不出来，就做了梯度pcr，结果发现最合适的pcr退火温度要比文献中的低8度左右。但是把pcr产物送去测序结果正确，请问各位虫子这是为何？只不过我用的是mix，文献中mg离子，dntp等。
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1楼2013-01-25 20:36:02
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xiayu608

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
5楼2013-08-02 10:06:57
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霹雳光

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这很正常，见怪不怪了
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事实证明，除了你自己，不要指望任何一个人
2楼2013-01-25 21:45:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物Tm值和离子强度有关。PCR体系不同，退火温度不同也算是正常的。虽然一般没有相差8度的。你说的最佳退火温度是指扩增效率最高吧，也许文献作者为了更好的特异性，用的退火温度比较高也说不定。
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3楼2013-01-26 08:13:00
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justdilo

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-26 08:13:00
引物Tm值和离子强度有关。PCR体系不同，退火温度不同也算是正常的。虽然一般没有相差8度的。你说的最佳退火温度是指扩增效率最高吧，也许文献作者为了更好的特异性，用的退火温度比较高也说不定。

高手
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我，一无所有！
4楼2013-01-26 11:21:13
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