应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆问题 求助~~
101/1返回列表
查看: 1098  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zg1415

金虫 (正式写手)

[求助] TA克隆问题 求助~~

最近TA克隆两个片段，大小分别为2kb和3.2kb,分别为下图左边6个和右边6个，中间和最后分别是λ/Hind 3和Marker 3，求分析转化子提质粒的电泳图，转进去了吗？ 个人感觉电泳图很奇怪~ 谢谢 ！

2013.1.18.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
一直被模仿，从未被超越
1楼 2013-01-19 17:45:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenfeng0519

金虫 (著名写手)
顶一个
回复此楼
2楼2013-01-19 18:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么T-载体？因为质粒超螺旋构象跑得比同分子量的marker快，最好做个单酶切确定质粒大小。
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-19 18:28:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zg1415

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-19 18:28:54
用的什么T-载体？因为质粒超螺旋构象跑得比同分子量的marker快，最好做个单酶切确定质粒大小。

pMD18T simple 用的东西应该都没问题，以前从未遇到过，都是一次成功~
赞一下 回复此楼
一直被模仿，从未被超越
4楼2013-01-19 21:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没用空白质粒比较下？加一个空白质粒作对照就知道了，看左边和右边条带位置差不多，可能有问题啊。
赞一下 回复此楼
一个人的努力和坚持！
5楼2013-01-19 21:12:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有没有连接成功，你可以转化了之后使用M13引物筛克隆呀
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-19 21:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zg1415 at 2013-01-19 21:05:00
pMD18T simple 用的东西应该都没问题，以前从未遇到过，都是一次成功~...

用载体通用引物做菌落PCR筛一下。
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-20 01:30:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x_iao_le

银虫 (小有名气)
你这胶用的有点浪费啊
赞一下 回复此楼
8楼2013-01-20 10:25:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逆天打酱油

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
卤煮上样比质粒大小的时候，由于质粒闭合环状结构造成超螺旋，所以线性分子的DNA马克是无法判断大小的，为此必须上的对照是你所连载体的空载，作为负对照。
若所选克隆跑琼脂糖胶大小比空载大，可暂且判断有片段连入载体。
想进一步判断，则需做PCR验证，做两个平行，一组是测序引物，一组是所连基因合成时候的首尾引物，若两者大小和预期一致，则基本可以判断连入片段为目的基因。
可加入酶切验证。
测序是最保险的验证方法，没有之一，PCR验证正确后，测序不失为好的手段。

祝实验顺利：）
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2013-01-20 10:47:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
顶9楼~全面~
回复此楼
10楼2013-01-22 15:43:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zg1415 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:47 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:46 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:27 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:26 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:07 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 08:06 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:52 by vs90ilomwc
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:46 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:27 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:26 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:07 by vs90ilomwc
[硕博家园] 博士延得我，科研能力直往上蹿 +8 偏振片 2026-02-02 8/400 2026-02-08 06:52 by liyeqik
[教师之家] 有院领导为了换新车，用横向课题经费买了俩车 +7 瞬息宇宙 2026-02-04 7/350 2026-02-07 21:47 by tfang
[有机交流] 酰胺脱乙酰基 10+5 chibby 2026-02-03 12/600 2026-02-07 19:29 by 江东闲人
[基金申请] 同年申请2项不同项目，第1个项目里不写第2个项目的信息，可以吗 +4 hitsdu 2026-02-06 4/200 2026-02-07 13:07 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福 +9 苏东坡二世 2026-02-04 10/500 2026-02-07 12:37 by 小毛球
[考博] 天津大学招2026.09的博士生，欢迎大家推荐交流（博导是本人） +4 a793625982 2026-02-05 5/250 2026-02-07 10:57 by a793625982
[公派出国] CSC & MSCA 博洛尼亚大学能源材料课题组博士/博士后招生｜MSCA经费充足、排名优 +4 雨念 2026-02-01 6/300 2026-02-06 23:32 by MelissaPon
[基金申请] 面上项目申报 +3 Tide man 2026-02-01 3/150 2026-02-05 22:56 by god_tian
[教师之家] 遇见不省心的家人很难过 +18 otani 2026-02-03 22/1100 2026-02-04 11:06 by tangmnt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭