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zg1415

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 934497
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专业: 环境微生物学

[求助] TA克隆问题求助~~

最近TA克隆两个片段，大小分别为2kb和3.2kb,分别为下图左边6个和右边6个，中间和最后分别是λ/Hind 3和Marker 3，求分析转化子提质粒的电泳图，转进去了吗？个人感觉电泳图很奇怪~ 谢谢！

2013.1.18.JPG

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一直被模仿，从未被超越

1楼 2013-01-19 17:45:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

逆天打酱油

金虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

卤煮上样比质粒大小的时候，由于质粒闭合环状结构造成超螺旋，所以线性分子的DNA马克是无法判断大小的，为此必须上的对照是你所连载体的空载，作为负对照。
若所选克隆跑琼脂糖胶大小比空载大，可暂且判断有片段连入载体。
想进一步判断，则需做PCR验证，做两个平行，一组是测序引物，一组是所连基因合成时候的首尾引物，若两者大小和预期一致，则基本可以判断连入片段为目的基因。
可加入酶切验证。
测序是最保险的验证方法，没有之一，PCR验证正确后，测序不失为好的手段。

祝实验顺利：）