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today521328

新虫 (初入文坛)

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专业: 系统生物学

[交流] 连接转化问题已有1人参与

大家好！
我做细菌多样性的，其中连接转化老是出问题！做了三次最后测序结果都是大肠杆菌，说明更没有连接转化成功，我想问一下怎么提高连接转化的成功率，我用的是PMD-19T质粒，用的是TOP10感受他细胞。是不是连接转化过程中操作出了问题还是本身连接转化率就很低啊！谢谢各位虫友了。

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1楼 2013-01-19 14:42:07

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
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虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-20 10:36:49

如何你怀疑连接的问题，可以把随便一个质粒酶切成线性后回收，然后自连检测连接酶是否工作。如果你怀疑转化的问题，感受态可以用control质粒按照说明取合适的量检测转化效率。不过，我认为你用的这些都是大家克隆常用的，不存在连接转化效率低的问题。当然T载体保存时间长了之后会发生自连，使连接效率下降。你可以检查一下是否是T-载体不好了。

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