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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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1949stone: MolEPI+1, 鼓励交流 2013-01-15 19:43:37
周志惠: 金币+5, 有帮助 2013-01-16 10:02:38
用的什么marker,上样量多少?目的片段和载体片段各上了几微升?此外,你的目的片段明显上样量太大,从胶上很难估算浓度。你可以用软件对比marker分析浓度。最好条带的亮度与分子量相当的marker条带接近。
2楼2013-01-15 09:58:27
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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-15 11:53:36
1949stone: MolEPI+1, good 2013-01-15 19:43:13
周志惠: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-01-16 10:04:25
首先,你得切胶回收,回收载体的5.7kb,还有片段的2kb。
片段如果是以质粒为模板PCR出来的,还要讲模板用限制性内切酶去消化,破坏模板的环状质粒。
然后,再做T4酶连接,具体量:
载体:片段=5:1---10:1,总体积不要超过10ul。
具体载体和片段的按照:1pmol  1000bp DNA=0.66ug去算,体积就是除以你回收后的浓度。
再加上等倍的酶去连接,再转化。
3楼2013-01-15 10:21:11
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