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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RACE技术 cDNA全长 DNA全长
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] RACE技术 cDNA全长 DNA全长

我现在已经根据保守序列设计引物，扩增出核心片段，然后通过RACE技术获了cDNA全长，现在我如何根据cDNA序列才能得到DNA的全长呢？因为我想接下来做SNP。
    求各位高手指点。
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼2013-01-12 11:01:08
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-12 19:00:51
崔永霞: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2013-01-16 16:32:34
最好是比对几种相近物种内含子和外显子分布情况，设计引物的时候尽量在外显子上的位置。但是有个简便的方法
找出开放阅读框，在起始密码子处设计上游引物，再在终止密码子处设计下游引物，以DNA作为模板，扩增出片段就拿去测序，一般都没有那么背的，祝你好运。
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3楼2013-01-12 17:07:27
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supersky3195

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-12 19:00:42
你根据核心片段设计RACE引物，退火温度要高些，60度以上，70的也可以。然后做3'和5’RACE，之后根据测序结果拼接你的全场。引物可以设计2对，2个上游引物为3’RACE引物，2个下游的为5'RACE引物。
我只是说一下简略的概述，具体你最好阅读TAKARA的试剂盒说明书，那些会告诉你更详细的内容。
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你今天的态度决定你今后的人生。
2楼2013-01-12 16:33:25
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jonew

木虫 (正式写手)
给你点资料   我也是新手！！！
RACE及实例分析.ppt(3.74MB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4Dc0-ib7yUAQAd6a?p=130497
赞一下 回复此楼
借口很贱，，，
4楼2013-01-13 22:05:29
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