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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] RACE技术 cDNA全长 DNA全长

我现在已经根据保守序列设计引物,扩增出核心片段,然后通过RACE技术获了cDNA全长,现在我如何根据cDNA序列才能得到DNA的全长呢?因为我想接下来做SNP。
    求各位高手指点。
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每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
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supersky3195

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-12 19:00:42
你根据核心片段设计RACE引物,退火温度要高些,60度以上,70的也可以。然后做3'和5’RACE,之后根据测序结果拼接你的全场。引物可以设计2对,2个上游引物为3’RACE引物,2个下游的为5'RACE引物。
我只是说一下简略的概述,具体你最好阅读TAKARA的试剂盒说明书,那些会告诉你更详细的内容。
你今天的态度决定你今后的人生。
2楼2013-01-12 16:33:25
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-12 19:00:51
崔永霞: 金币+5, 有帮助, 谢谢 2013-01-16 16:32:34
最好是比对几种相近物种内含子和外显子分布情况,设计引物的时候尽量在外显子上的位置。但是有个简便的方法
找出开放阅读框,在起始密码子处设计上游引物,再在终止密码子处设计下游引物,以DNA作为模板,扩增出片段就拿去测序,一般都没有那么背的,祝你好运。
3楼2013-01-12 17:07:27
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jonew

木虫 (正式写手)

给你点资料   我也是新手!!!
RACE及实例分析.ppt(3.74MB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4Dc0-ib7yUAQAd6a?p=130497
借口很贱,,,
4楼2013-01-13 22:05:29
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