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sd3824289

木虫 (正式写手)

[交流] SDS-PAGE图总是这样，大家有没有好的建议

我做原核表达，诱导完了之后SDS-PAGE，结果图总是跑歪了，不知道是什么原因，请各位高手指点指点！
    而且我怎么在图上看不到差异表达的蛋白呢？是不是载体根本就没有表达？表达条件1mM IPTG 诱导5h，33-35℃。

蛋白.jpg
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1楼 2013-01-10 16:31:57
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回帖置顶 ( 共有1个 )

userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
amisking: 回帖置顶 2013-01-10 20:27:31
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4789811
http://www.dxy.cn/bbs/thread/5962824#5962824
http://d.dxy.cn/preview/1470719
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4楼2013-01-10 17:31:02
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494750284

木虫 (小有名气)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
你把没点样的孔点SDS loading buffer了吗
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5楼2013-01-10 17:43:03
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wenzonglu

木虫 (正式写手)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
标准条带都跑得那么差，无语。降低电流延长电泳时间，胶两端边的孔不用(不加样，可只加上样缓冲液)。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-01-10 17:49:49
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
你的样品是多大的？
建议重新表达吧
上样量可以降低100或者200ul菌体离心处理 就可以
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8楼2013-01-10 19:57:05
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ceibas

银虫 (初入文坛)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
样品过浓缩胶时没浓缩好.
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9楼2013-01-10 20:19:43
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sd3824289

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by userhung at 2013-01-10 17:31:02
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4789811
http://www.dxy.cn/bbs/thread/5962824#5962824
http://d.dxy.cn/preview/1470719

谢谢啦！
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10楼2013-01-10 20:21:27
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sd3824289

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 494750284 at 2013-01-10 17:43:03
你把没点样的孔点SDS loading buffer了吗

这个倒没有！这个也影响吗？
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11楼2013-01-10 20:22:13
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秋日@恋歌

银虫 (小有名气)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
我觉得是胶的问题 可以让别人帮忙跑一次 看看是技术问题还是样品

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2013-01-10 20:31:48
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494750284

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by sd3824289 at 2013-01-10 20:22:13
这个倒没有！这个也影响吗？...

可以很肯定的说，有影响。在没加样品的孔里加入5微升的sds buffer，以前培训的时候讲的
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13楼2013-01-10 21:51:08
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czb002

金虫 (正式写手)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
把没有加样的点样孔加上相同浓度的loading buffer。
主要是电泳时离子系统不平衡，高浓度向低浓度扩散所致。
做这个不要预电泳，浓缩胶电泳时电压低一些。
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15楼2013-01-11 11:11:54
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tangzhonghua

木虫 (著名写手)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主一顺百顺万事顺
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16楼2013-01-11 22:11:51
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逆天打酱油

金虫 (正式写手)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
卤煮......你做下层胶水封的时候是不是在一个位置加水的啊.........................

如果是的话，那么歪了就是因为你加水在一个位置造成整块胶浓度不均匀.......

这样的话，那就温柔滴水封吧，或者下层胶做好5MIN后再水封吧..................

祝实验顺利
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17楼2013-01-15 10:40:45
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piaoyingaza2楼
2013-01-10 16:48   回复  
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
茅塞顿开3楼
2013-01-10 17:03   回复  
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
晕月山江7楼
2013-01-10 17:55   回复  
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
.
kiss2008553714楼
2013-01-10 22:51   回复  
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
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