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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE图总是这样，大家有没有好的建议
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sd3824289

木虫 (正式写手)

[交流] SDS-PAGE图总是这样，大家有没有好的建议

我做原核表达，诱导完了之后SDS-PAGE，结果图总是跑歪了，不知道是什么原因，请各位高手指点指点！
    而且我怎么在图上看不到差异表达的蛋白呢？是不是载体根本就没有表达？表达条件1mM IPTG 诱导5h，33-35℃。

蛋白.jpg
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1楼 2013-01-10 16:31:57
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czb002

金虫 (正式写手)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
把没有加样的点样孔加上相同浓度的loading buffer。
主要是电泳时离子系统不平衡，高浓度向低浓度扩散所致。
做这个不要预电泳，浓缩胶电泳时电压低一些。
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15楼2013-01-11 11:11:54
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
amisking: 回帖置顶 2013-01-10 20:27:31
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4789811
http://www.dxy.cn/bbs/thread/5962824#5962824
http://d.dxy.cn/preview/1470719
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4楼2013-01-10 17:31:02
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494750284

木虫 (小有名气)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
你把没点样的孔点SDS loading buffer了吗
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5楼2013-01-10 17:43:03
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wenzonglu

木虫 (正式写手)
★
sd3824289(金币+1): 谢谢参与
标准条带都跑得那么差，无语。降低电流延长电泳时间，胶两端边的孔不用(不加样，可只加上样缓冲液)。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-01-10 17:49:49
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