24小时热门版块排行榜    

查看: 1341  |  回复: 4

桃之夭夭pFly

新虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量 相同基因不同处理条件下的相对定量

第一次接触,自己也看了很多资料,依然有点糊涂,希望各位能人予以指点啊~在此先谢过了!
目的:看一个基因在胁迫条件下表达量的变化。
实验样本:一株植物胁迫0,1,2,3,4,5,6h后取材
已选定目的基因和内参基因,Tm值和产物长度类似
疑问:1、在确定目的基因和内参基因扩增效率是否一致时,每个时期的样本均需要做,还是只选择一个时期的做就可以?
2、在设置稀释梯度时,同一梯度的样本副本,是采用同一时期不同花朵所提RNA,还是同一花朵所提RNA的分装?
3、扩增效率是不是来筛选最佳的反应条件的,只要是筛选到合适的,正式试验的时候就不需要稀释成各个梯度来做,直接以各个处理时期的样本来扩增内参、目的基因就可以了~?
谢谢~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txw87

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 做一次就行。
2. 同一花朵,这个属于标准品,当然要固定一个样本啦。
3. 对,稀释梯度是为了做标准曲线,为了看扩增效率的,如果效率接近,每次就用相对定量就好了,不用做标准曲线了。
2楼2013-01-10 13:41:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
2楼说的对,如果扩增效率在5% 的误差范围内,我建议用相对定量,这个比较简单,不然你做决定定量的话,每次做样品的同时都要做标准曲线
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
3楼2013-01-10 13:51:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桃之夭夭pFly

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by txw87 at 2013-01-10 13:41:55
1. 做一次就行。
2. 同一花朵,这个属于标准品,当然要固定一个样本啦。
3. 对,稀释梯度是为了做标准曲线,为了看扩增效率的,如果效率接近,每次就用相对定量就好了,不用做标准曲线了。

太感谢了!回答得清晰明了~瞬间明白了!太感谢了~
4楼2013-01-11 12:53:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桃之夭夭pFly

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 475502411 at 2013-01-10 13:51:12
2楼说的对,如果扩增效率在5% 的误差范围内,我建议用相对定量,这个比较简单,不然你做决定定量的话,每次做样品的同时都要做标准曲线

好的~感谢感谢`
5楼2013-01-11 13:03:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 桃之夭夭pFly 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] 我面上完蛋了 +6 且听虎啸 2026-08-20 6/300 2026-08-21 10:59 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 让我中一个面上吧! +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +22 yaoyewhu2008 2026-08-20 24/1200 2026-08-21 07:44 by DanielDDDD
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见