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转基因猴子

木虫 (正式写手)

[求助] 重组大肠杆菌 镍柱纯化

各位虫子
我最近遇到了一个头疼的问题
我构建了一株重组大肠杆菌,载体是pET8a,宿主是BL21(3)
用TB培养基发酵24小时后离心收菌,超声波破碎离心后,通过镍柱纯化。
今天SDS-PAGE结果显示在破碎后样品和上样后洗脱样品中有蛋白条带,而且很多。而在不同浓度的咪唑洗下来的溶液中没有条带。胞外酶液有很多条带。
总而言之,重组大肠杆菌发酵后有部分分泌到胞外,有部分在胞内。在胞内的呢,挂不住镍柱,虫子们,这是为什么呢?
紧急求助啊
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

你应该把具体的纯化条件写出来,才好分析。
生物资源交流QQ群:1044518333
2楼2013-01-07 20:59:56
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