24小时热门版块排行榜    

查看: 2348  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)

[求助] 关于镍柱纯化,急求,!!

真是太怪异了。
我用大肠杆菌表达了一个可溶性蛋白,经质粒测序,序列都是没问题的,,这个可溶性蛋白我用镍柱纯化,,细菌破碎后,,上清液我过镍柱,,经过淋洗后用高浓度咪唑洗脱,洗脱下来后浓缩,,然后SDS-PAGE检测,,发现 没有我的目的蛋白,而是大肠杆菌自身蛋白,,这是怎么回事?
这个情况我碰到两次了,,上次一个蛋白也是这种情况,,用镍柱纯化的蛋白不是我的目的蛋白,,,真是怪异,,急求!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-07 16:57:37
把诱导前的样品和诱导后的样品对比,确定诱导出的蛋白分子量正确。再把诱导的样品做全蛋白和可溶蛋白比较,确定蛋白是否真的在可溶部分。纯化时每个组(上柱前,flow through,wash,elute)分预留样品,做Western分析,确定纯化步骤中没有把目的蛋白丢失。
4楼2013-01-06 02:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

viki_MDK

银虫 (正式写手)

大家有碰到过这种情况吗
2楼2013-01-05 22:06:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没纯化的总蛋白是否有目的蛋白呢?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-01-05 23:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-07 16:57:45
前面的那位说的不错!
你这个目的是不是真的有表达,你也没有验证!序列正确是一方面,你还是要看诱导表达之后,sds-page检测一下是否有你的目的蛋白表达!
其二,很可能你的破菌上清中就没有目的蛋白!目的蛋白在你的破菌沉淀中!可能原因有可能是选择的buffer pH不合适,或者破菌条件需要调整,或者你的目的蛋白本身就包涵体表达!
5楼2013-01-06 08:48:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-12 6/300 2026-08-13 08:51 by zhengxianzb
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
信息提示
请填处理意见