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小小虫2012

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取遇到的问题

最近提RNA遇到了很多问题,希望大侠们帮我看看电泳图。图中共有13个泳道,2-5,6-9,10-13分别是三个不同时期的样品4次重复。但是2-9的点样孔中很亮,但是没有出现RNA的主带,但是同时提取的10-13道泳道却没有。不知道是什么原因,重提RNA之后,还是点样孔中还很亮,情况一样。上样是4ul DEPC水+1ul RNA+1ul Loading Buffer。现在很着急把这个时期样品的RNA 提出来,请各位大侠帮我分析分析~~~~不胜感激!!!

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hubinghello

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

对于木本果树的话,28S的亮度不为18S亮度的两倍是很正常的。园艺植物成熟果实组织与叶片等营养组织存在较大的差异,往往出现一种方法只适用于某种植物其中一种或数种组织的情形。
去爱吧,像不曾爱过一样;跳舞吧,像没有人观看一样;唱歌吧,像没有人聆听一样;生活吧,像每天都是世界末日一样;赚钱吧,像不是为了钱一样。
9楼2013-01-11 13:41:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-04 13:50:10
总体来说RNA有降解,好的RNA第一条带应该是最亮的,是第二条的大致两倍。不知道你的样品是要做什么用。
2-9泳道的样品有蛋白污染,所以点样孔亮。而且RNA浓度低。2-5下面还是能看见一点,浓度不高而已。我觉得是你的样品蛋白没去干净,你可以用酚氯仿抽提一下。6-9感觉是不行的了。如果你的样品是同时提的,很有可能是样品本身的问题。有些样品由于处理和生长时期不同,RNA不是很好提的。
2楼2013-01-03 14:29:42
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小小虫2012

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-03 14:29:42
总体来说RNA有降解,好的RNA第一条带应该是最亮的,是第二条的大致两倍。不知道你的样品是要做什么用。
2-9泳道的样品有蛋白污染,所以点样孔亮。而且RNA浓度低。2-5下面还是能看见一点,浓度不高而已。我觉得是你 ...

2-9的样品是幼果期的果肉,可能还有部分种子,后面的是果实膨大期的,样品重量都是在0.7g,这会不会跟幼果期的RNA含量比较多,裂解液对幼果的处理没有完全充分?对于蛋白质的污染,我都没吸取中间层,而且增加了一次氯仿异戊醇抽提。不知道是什么原因
3楼2013-01-03 14:42:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小虫2012 at 2013-01-03 14:42:15
2-9的样品是幼果期的果肉,可能还有部分种子,后面的是果实膨大期的,样品重量都是在0.7g,这会不会跟幼果期的RNA含量比较多,裂解液对幼果的处理没有完全充分?对于蛋白质的污染,我都没吸取中间层,而且增加了一次 ...

不同时期的组织中蛋白、糖、脂类的相对含量都会不同,如果杂质多,分RNA的时候就更麻烦,污染也多。我不是很清楚你做的这些组织,如果你的提取方法都是一样的,很可能是样品特殊性造成的。你可能需要问问有这方面经验的人,或者自己摸索。
4楼2013-01-03 15:06:13
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