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小小虫2012

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取遇到的问题

最近提RNA遇到了很多问题，希望大侠们帮我看看电泳图。图中共有13个泳道，2-5,6-9,10-13分别是三个不同时期的样品4次重复。但是2-9的点样孔中很亮，但是没有出现RNA的主带，但是同时提取的10-13道泳道却没有。不知道是什么原因，重提RNA之后，还是点样孔中还很亮，情况一样。上样是4ul DEPC水＋1ul RNA＋1ul Loading Buffer。现在很着急把这个时期样品的RNA 提出来，请各位大侠帮我分析分析~~~~不胜感激！！！

RNA.jpg
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1楼 2013-01-03 14:09:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-04 13:50:10
总体来说RNA有降解，好的RNA第一条带应该是最亮的，是第二条的大致两倍。不知道你的样品是要做什么用。
2-9泳道的样品有蛋白污染，所以点样孔亮。而且RNA浓度低。2-5下面还是能看见一点，浓度不高而已。我觉得是你的样品蛋白没去干净，你可以用酚氯仿抽提一下。6-9感觉是不行的了。如果你的样品是同时提的，很有可能是样品本身的问题。有些样品由于处理和生长时期不同，RNA不是很好提的。
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2楼2013-01-03 14:29:42
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小小虫2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-03 14:29:42
总体来说RNA有降解，好的RNA第一条带应该是最亮的，是第二条的大致两倍。不知道你的样品是要做什么用。
2-9泳道的样品有蛋白污染，所以点样孔亮。而且RNA浓度低。2-5下面还是能看见一点，浓度不高而已。我觉得是你 ...

2-9的样品是幼果期的果肉，可能还有部分种子，后面的是果实膨大期的，样品重量都是在0.7g,这会不会跟幼果期的RNA含量比较多，裂解液对幼果的处理没有完全充分？对于蛋白质的污染，我都没吸取中间层，而且增加了一次氯仿异戊醇抽提。不知道是什么原因
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3楼2013-01-03 14:42:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小虫2012 at 2013-01-03 14:42:15
2-9的样品是幼果期的果肉，可能还有部分种子，后面的是果实膨大期的，样品重量都是在0.7g,这会不会跟幼果期的RNA含量比较多，裂解液对幼果的处理没有完全充分？对于蛋白质的污染，我都没吸取中间层，而且增加了一次 ...

不同时期的组织中蛋白、糖、脂类的相对含量都会不同，如果杂质多，分RNA的时候就更麻烦，污染也多。我不是很清楚你做的这些组织，如果你的提取方法都是一样的，很可能是样品特殊性造成的。你可能需要问问有这方面经验的人，或者自己摸索。
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4楼2013-01-03 15:06:13
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小小虫2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-03 15:06:13
不同时期的组织中蛋白、糖、脂类的相对含量都会不同，如果杂质多，分RNA的时候就更麻烦，污染也多。我不是很清楚你做的这些组织，如果你的提取方法都是一样的，很可能是样品特殊性造成的。你可能需要问问有这方面经 ...

嗯嗯，好的，谢谢~~~
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5楼2013-01-03 15:40:53
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富贵列车88

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
组织差异引起的，量有差异
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6楼2013-01-03 21:28:05
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luyourebecca

银虫 (小有名气)
guess who am i
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7楼2013-01-03 23:22:08
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hubinghello

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

幼果时期会比较多酚多糖。你用大量法还是试剂盒？加上平衡酚抽提蛋白好些。试剂盒的话，注意DNase要去除干净。
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去爱吧，像不曾爱过一样；跳舞吧，像没有人观看一样；唱歌吧，像没有人聆听一样；生活吧，像每天都是世界末日一样；赚钱吧，像不是为了钱一样。
8楼2013-01-11 13:36:42
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hubinghello

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

对于木本果树的话，28S的亮度不为18S亮度的两倍是很正常的。园艺植物成熟果实组织与叶片等营养组织存在较大的差异，往往出现一种方法只适用于某种植物其中一种或数种组织的情形。
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去爱吧，像不曾爱过一样；跳舞吧，像没有人观看一样；唱歌吧，像没有人聆听一样；生活吧，像每天都是世界末日一样；赚钱吧，像不是为了钱一样。
9楼2013-01-11 13:41:49
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