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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接转化问题
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today521328

新虫 (初入文坛)

[交流] 连接转化问题

各位高手
    有谁做环境微生物的吗，我有两个问题想请教。
    1、转化时没有碎冰，用冰块会不会影响转化结果啊！
    2、建库后酶切带型比较少，是样品本身菌种少还是连接转化出了问题。但是同样的样品为什么我师兄做出来的带型比较多啊！
    求高手帮忙解决，谢谢！
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1楼 2013-01-02 14:00:45
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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today521328: 金币+3 2013-01-03 15:04:12
冰块当然效果不好，最好的是冰水混合物，这样温度更接近零度。至于你说的带型少，也不能说明多样性差，继续做试试吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-01-02 22:43:26
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郜珊

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用碎冰好，最好要拍实了。这样温度会低。
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4楼2013-01-03 12:07:16
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dongrh1981

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-07 15:42:07
转化时碎冰比较好。连接时的温度要控制好。
另外，建议你仔细看下你建库的目的基因序列，分析下应该酶切应该出来几条带，应该出几条就是几条，不见得条带多就是好事，如果怀疑菌浓度不够就仔细分析下实验过程，比如用的载体和PCR产物的质量，用的感受态细胞的活性及量等。
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5楼2013-01-04 17:24:51
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tankleiming

新虫 (小有名气)
榔头敲啊
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6楼2013-01-04 19:02:23
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gaowh1988

铜虫 (初入文坛)
★
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做转化时碎冰比冰块好。
   条带多少，与内切酶有关。建议你查查目的基因序列有几个酶切位点，条带多不一定好。
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7楼2013-01-07 12:28:31
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su-b082楼
2013-01-02 17:47   回复  
today521328: 金币+7 2013-01-03 15:04:04
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