24小时热门版块排行榜    

查看: 1001  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hwchen2000

金虫 (正式写手)

[求助] RT-PCR高手请进

请高手们帮我看看RT-PCR的电泳图,给点建议
图2中箭头所指是曾经得到的产物,但是之后再也没有重复到,图1是PCR和第二轮PCR结果

图片1.jpg

图片2.jpg



[ Last edited by hwchen2000 on 2013-1-2 at 11:05 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议你使用梯度TM温度,再做RT-PCR试试
shine
3楼2013-01-04 16:59:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你得到的片段太不明显,很没有说服力,建议你重新设计引物。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2013-01-02 17:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huiniss

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主的RT-PCR没有做出来,首先要确定产物的大小,和标准条带对比看看是否扩增出来了,从两个图看,根本没有扩增出来。如果已经重复很多次了都是这样的话,建议重新开始:方法一、提取mRNA时先跑个琼脂糖快速电泳看看是否出现2或3个条带,出现的话说明mRNA这一步没有问题;方法二、换成随机引物做PCR扩增,如果出现明显条带就说明楼主的引物设计有问题,如果不出现条带说明可能是mRNA降解了压根就没有成功合成过cDNA。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-01-04 17:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hwchen2000

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by huiniss at 2013-01-04 17:53:46
楼主的RT-PCR没有做出来,首先要确定产物的大小,和标准条带对比看看是否扩增出来了,从两个图看,根本没有扩增出来。如果已经重复很多次了都是这样的话,建议重新开始:方法一、提取mRNA时先跑个琼脂糖快速电泳看看 ...

mRNA跑过胶的,没有问题
现在的想法可能是引物的问题,因为我是用玉米等主要作物的同源序列设计的引物,目标植物是木本森林植物,可能物种之间的亲缘关系的问题造成引物不合适,所以现在想重新设计引物
谢谢你!
5楼2013-01-07 20:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 4/200 2026-08-19 17:54 by oCMhZAsgNFoO
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 5/250 2026-08-19 17:42 by oCMhZAsgNFoO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cHIDTWCTtLlG 2026-08-19 5/250 2026-08-19 17:30 by oCMhZAsgNFoO
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +10 ziyangfang 2026-08-19 11/550 2026-08-19 17:19 by wdc28
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +4 瞬息宇宙 2026-08-15 4/200 2026-08-19 16:23 by allmydream
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +8 kkkl_v 2026-08-19 8/400 2026-08-19 12:34 by Vivilian
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
请填处理意见