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liudianlei

银虫 (小有名气)

[求助] 连接检测时双酶切总是切不开

目的基因连接到质粒后,转化后的菌做了一个菌落pcr,P出来了,摇菌提质粒,提出来的浓度很低,做双酶切,切出来的只有一条带,不是两条带,大家帮着分析一下是连接没成功还是别的原因?
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liudianlei

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-29 01:57:33
SacI对盐和pH比较敏感。如果提质粒浓度稀而且提的时候用的是缓冲液洗脱的话,在酶切体系中如果加入质粒的体积大可能造成切不开。你可以试试单酶切是否能分别切开。解决这个问题最简单的办法就是同样的质粒用量,加大 ...

谢谢。我试试
10楼2012-12-29 20:00:12
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查看全部 10 个回答

ego369

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-12-28 21:05:47
liudianlei: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-28 21:10:31
是不是转化后的菌对你的酶切位点修饰了,单酶切大小对不?对的话,应该问题不大!看一下是不是酶的问题
2楼2012-12-28 20:27:48
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liudianlei

银虫 (小有名气)

我没有做单酶切,下一步想做一下单酶切试试,谢谢你的提醒。
3楼2012-12-28 21:08:36
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liudianlei: 金币+2, 有帮助 2012-12-28 21:34:37
你这是连在T载体上然后双酶切吗,我估计可能是引物合成的问题,多挑几个克隆试试吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2012-12-28 21:24:34
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