应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 体外蛋白纯化
101/1返回列表
查看: 1336  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

落泪天使

新虫 (初入文坛)

[求助] 体外蛋白纯化

我的基因原核表达是包涵体的形式存在的，而我想做蛋白的活性，要纯化蛋白，不知道该怎么办才能使蛋白可溶呢？我的表达载体是pGEX，有人能指导一下吗？



非常感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-05 17:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑试试SUMO标签载体。
赞一下 回复此楼
静心做事。
2楼2012-12-05 20:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-12-08 07:17:29
可以先用盐酸胍或是尿素变性纯化，然后再复性就行了。
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-06 08:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议调整一下温度，诱导剂浓度和诱导时间，使其尽可能的减少包涵体
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-06 13:15:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物小通

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-12-08 07:17:15
可以选择换标签，我们用TRX一般都有可溶的。多尝试温度等变化对表达的影响，最好不要用变性复性的方法，一个是难，另一个是没有好的方法进行全面的检测活性恢复。
赞一下 回复此楼
学习，进步
5楼2012-12-07 08:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
破壁了萃取不行吗？
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-07 13:15:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaorongbest

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我记得我们师兄当时是用超声破碎来做的，你可以试试行不行，可以在冰上超声，以免细胞活性降低，或者加一点蛋白酶抑制剂，都可以先试试，一般蛋白纯化需要几种方法连用，还有标签的选择等很多问题
赞一下 回复此楼
为客户提供更好的科研外包服务：如分子、免疫、病理、细胞培养、动物实验等
7楼2012-12-07 15:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
除了摸索表达条件外，换载体也是一种方法，同时试一下包涵体复溶。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2012-12-08 01:36:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

【答案】应助回帖

1.先处理包涵体，除去一些杂质，用去垢剂EDTA,DTT，脱氧胆酸钠，DNase 1，溶解湿菌体，破菌，收集包涵体
2.变性。8~10M尿素变性
3.复性。比较困难2M尿素，添加一些精氨酸，Tris，EDTA 等
赞一下 回复此楼
笑对人生，相信自己。
9楼2012-12-14 13:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyoucao52

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

变复性得到的活性蛋白会减少，最好是调整诱导剂浓度，低温诱导等，先少量看看是否有可溶性的产生，还是这样比较省事
赞一下 回复此楼
10楼2012-12-14 14:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 落泪天使 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 05:34 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:26 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭