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落泪天使

新虫 (初入文坛)

[求助] 体外蛋白纯化

我的基因原核表达是包涵体的形式存在的,而我想做蛋白的活性,要纯化蛋白,不知道该怎么办才能使蛋白可溶呢?我的表达载体是pGEX,有人能指导一下吗?



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gaorongbest

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我记得我们师兄当时是用超声破碎来做的,你可以试试行不行,可以在冰上超声,以免细胞活性降低,或者加一点蛋白酶抑制剂,都可以先试试,一般蛋白纯化需要几种方法连用,还有标签的选择等很多问题
为客户提供更好的科研外包服务:如分子、免疫、病理、细胞培养、动物实验等
7楼2012-12-07 15:12:50
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以考虑试试SUMO标签载体。
静心做事。
2楼2012-12-05 20:53:31
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-12-08 07:17:29
可以先用盐酸胍或是尿素变性纯化,然后再复性就行了。
3楼2012-12-06 08:31:29
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议调整一下温度,诱导剂浓度和诱导时间,使其尽可能的减少包涵体
4楼2012-12-06 13:15:21
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