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落泪天使

新虫 (初入文坛)

[求助] 体外蛋白纯化

我的基因原核表达是包涵体的形式存在的,而我想做蛋白的活性,要纯化蛋白,不知道该怎么办才能使蛋白可溶呢?我的表达载体是pGEX,有人能指导一下吗?



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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

【答案】应助回帖

1.先处理包涵体,除去一些杂质,用去垢剂EDTA,DTT,脱氧胆酸钠,DNase 1,溶解湿菌体,破菌,收集包涵体
2.变性。8~10M尿素变性
3.复性。比较困难2M尿素,添加一些精氨酸,Tris,EDTA 等
笑对人生,相信自己。
9楼2012-12-14 13:05:16
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以考虑试试SUMO标签载体。
静心做事。
2楼2012-12-05 20:53:31
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-12-08 07:17:29
可以先用盐酸胍或是尿素变性纯化,然后再复性就行了。
3楼2012-12-06 08:31:29
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议调整一下温度,诱导剂浓度和诱导时间,使其尽可能的减少包涵体
4楼2012-12-06 13:15:21
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