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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 体外蛋白纯化
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落泪天使

新虫 (初入文坛)

[求助] 体外蛋白纯化

我的基因原核表达是包涵体的形式存在的，而我想做蛋白的活性，要纯化蛋白，不知道该怎么办才能使蛋白可溶呢？我的表达载体是pGEX，有人能指导一下吗？



非常感谢！
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1楼 2012-12-05 17:34:15
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

【答案】应助回帖

1.先处理包涵体，除去一些杂质，用去垢剂EDTA,DTT，脱氧胆酸钠，DNase 1，溶解湿菌体，破菌，收集包涵体
2.变性。8~10M尿素变性
3.复性。比较困难2M尿素，添加一些精氨酸，Tris，EDTA 等
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笑对人生，相信自己。
9楼2012-12-14 13:05:16
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑试试SUMO标签载体。
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静心做事。
2楼2012-12-05 20:53:31
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-12-08 07:17:29
可以先用盐酸胍或是尿素变性纯化，然后再复性就行了。
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3楼2012-12-06 08:31:29
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议调整一下温度，诱导剂浓度和诱导时间，使其尽可能的减少包涵体
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4楼2012-12-06 13:15:21
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