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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR体系改变
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duane

至尊木虫 (正式写手)

[交流] 关于PCR体系改变 已有6人参与

小虫最近在做pcr，从别人的文章中查到了pcr的体系总共是15ul。上下游引物个0.3ul，模板1ul，mix 7.5ul，水补齐。但是由于P出来的结果要测序，在这个15ul的体系下，检测需要4ul左右。剩下的10ul左右达不到测序的最低要求。所以想换个体系，做个25ul的。但是引物和模板的量不知道是怎么加的，那位好心的虫虫能够帮下忙给指点一下！
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1楼 2012-12-05 16:10:15
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般来说是相应的增加倍数，模板，是需要根据纯度及浓度做相应的调整，
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2楼2012-12-05 16:17:00
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duane

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2012-12-05 16:17:00
一般来说是相应的增加倍数，模板，是需要根据纯度及浓度做相应的调整，

多谢了，还在摸索！
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3楼2012-12-06 09:45:45
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dajiong

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
mix是2X的。25uL就加12.5么。剩下的模板1ul，引物各0.5，然后用水补足应该就可以了。
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哦也
4楼2012-12-06 12:33:39
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diandong

禁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
5楼2012-12-06 19:38:00
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duane

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by diandong at 2012-12-06 19:38:00
测序可以给菌液或质粒啊。

6楼2012-12-07 14:00:34
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小齐018

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以一次多p几管，我一般25微升体系的跑三管，回收的时候加30微升，两个孔平行，这样的话你胶回收的得率就会大一些，25微升体系：mix 12.5 水9.5 引物各1 模版1
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7楼2012-12-07 14:12:11
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heshenglin

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看不懂，我不会算体系。哎。
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8楼2013-10-08 16:51:44
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wencheng1109

银虫 (小有名气)
★
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你就直接用15微升的做，多做几个，跑胶检测后混起来就可以了，体系变了可能做不出来，还得摸索条件，浪费时间

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-10-08 19:51:15
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