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cai3110274木虫 (职业作家)
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[求助]
求助关于real-time PCR 内参选择问题
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| 我看到很多文献上说 现在 国外的杂志都要求两个或以上的内参基因来校正，我想了解下 如果选择两个不同内参，那么分析的时候以哪个为准呢 还是两个都要？还是有什么比较的方法？求解 |
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henryxue
木虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cai3110274: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 非常感谢您 2012-12-02 21:48:51
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cai3110274: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 非常感谢您 2012-12-02 21:48:51
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我们实验室里所选的是biorad的实验和分析系统，软件中可以把两个内参都加上然后再作图，但貌似不能导入其他系统的数据…… 选择不同的内参，我所遇到的主要的情况就是细胞刺激后，内参基因也随之发生变化，从而导致内参不再具有参考性，因此选择多个内参来降低这种效应。 多内参的选择一定要有所区分，不要一个actin一个tubulin，这样是没有意义的，我在选择内参时，会选actin，18s rRNA以及GAPDH中的2个，主要是基于这3个内参基因代表了细胞内3种不同的功能。当然你也可以去查一些文献，有人专门对内参基因的选择做了研究。 如果有能力，还是上蛋白水平吧，除非miRNA之类的，否则realtime还是会有坑人的地方的，毕竟蛋白的半衰期、翻译后修饰才是真正体现蛋白在细胞内的活性，跟RNA的水平还是会有些差异的 |
2楼2012-12-02 13:59:56
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