应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建基因文库（sauA酶切后胶回收 效率低 该怎么办
51/1返回列表
查看: 2089  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 构建基因文库（sauA酶切后胶回收 效率低 该怎么办

各位大侠：最近在构建基因文库，遇到一些问题,请各位帮忙解决一下啦
我用sauA不完全酶切基因组，得到合适范围的基因片段（2-6kb），再用试剂盒进行胶回收，发现胶回收效率很低，（附件是我回收前后基因片段大小的对比），上样量一样，但是回收后条带明显变得暗很多。
还有个问题：我回收的是2-6kb的片段，可回收后发现片段明显变小了，这是怎么回事？我该怎么调整我的实验方案？拜托各位了!
除了试剂盒回收，还有其他高效的回收方法吗？

回收前后对比（左：回收后；右：回收前）.jpg

[ Last edited by hraikeyan on 2012-11-16 at 23:08 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
nothing isimpossible
1楼 2012-11-16 23:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hraikeyan: 金币+3 2012-11-18 18:41:31
最好使用质量过硬的胶回收试剂盒。跑电泳时电压放低30-50伏，电压过高，带型分不开。2-6K的弥散带里掺杂小带没跑开。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-11-17 23:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

凌宫雪

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不好意思，我不知道这是怎么回事，但是我在切胶前有带回收胶后就没有条带了，也好郁闷。。。
赞一下 回复此楼
SOFARSOGOOD!!!
2楼2012-11-16 23:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌宫雪 at 2012-11-16 23:55:44
不好意思，我不知道这是怎么回事，但是我在切胶前有带回收胶后就没有条带了，也好郁闷。。。

你是用试剂盒做的胶回收还是用其他方法做的？还有你切的胶大吗？我看有文献说切胶切的太大，也会影响回收效率。
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
3楼2012-11-17 17:23:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-17 23:47:37
最好使用质量过硬的胶回收试剂盒。跑电泳时电压放低30-50伏，电压过高，带型分不开。2-6K的弥散带里掺杂小带没跑开。

我们使用的是Qiaquick胶回收试剂盒，应该是挺好的了。我跑电泳时是选用最小的梳子，这样每个孔加的样很少，以至于很多孔才能上完所有的样，最后导致切胶的体积过大，以至于回收率低。我想下次跑胶时使用最大的梳子，这样可以减少胶体积。
还有一个问题：我回收的是200ulDNA溶液酶切结果，用三个柱子同时回收，是不是用的柱子太多了，这也影响柱效？sau3A Ⅰ酶用buffer做了十倍的稀释，存放在-20℃三四天还能用吗？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
5楼2012-11-18 14:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭