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hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 构建基因文库(sauA酶切后胶回收 效率低 该怎么办

各位大侠:最近在构建基因文库,遇到一些问题,请各位帮忙解决一下啦
我用sauA不完全酶切基因组,得到合适范围的基因片段(2-6kb),再用试剂盒进行胶回收,发现胶回收效率很低,(附件是我回收前后基因片段大小的对比),上样量一样,但是回收后条带明显变得暗很多。
还有个问题:我回收的是2-6kb的片段,可回收后发现片段明显变小了,这是怎么回事?我该怎么调整我的实验方案?拜托各位了!
除了试剂盒回收,还有其他高效的回收方法吗?

回收前后对比(左:回收后;右:回收前).jpg

[ Last edited by hraikeyan on 2012-11-16 at 23:08 ]
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克隆大虾

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hraikeyan: 金币+3 2012-11-18 18:41:31
最好使用质量过硬的胶回收试剂盒。跑电泳时电压放低30-50伏,电压过高,带型分不开。2-6K的弥散带里掺杂小带没跑开。
4楼2012-11-17 23:47:37
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-19 13:48:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-18 14:12:15
我们使用的是Qiaquick胶回收试剂盒,应该是挺好的了。我跑电泳时是选用最小的梳子,这样每个孔加的样很少,以至于很多孔才能上完所有的样,最后导致切胶的体积过大,以至于回收率低。我想下次跑胶时使用最大的梳子 ...

当然是用宽梳子了,或者用胶带粘起来。用一个柱子就可以了,溶胶了,反复上,就可以,你可以看下每个柱子有最大DNA结合量,一般不会超载.sau3A Ⅰ酶我们一般现用现配.
6楼2012-11-18 21:13:06
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