| 查看: 1561 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
charles08铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
假阳性克隆的问题
|
|
|
最近一直在做克隆，用的载体是TAKARA的PMD18-T， 克隆的DNA片段1100bp左右，为普通TAQ酶（非保真）扩增。 筛选蓝白斑后挑白斑做PCR快速鉴定很久都检测不到阳性结果（如图），然后听取网友建议将94的预变性时间改为10分钟，侥幸得到2个弱弱的条带，然后挑其他白斑重复均得不到有效结果。非常奇怪、原来做这种克隆一个星期以内绝对会出结果，随便挑斑就能出来。现在怎么这么难，挑了10-20个克隆还不能出现阳性。 弱弱问下各位帮忙分析下可能的原因在哪里？ 如果是假阳性问题，那么怎么才能提高转化效率？ 另外，一直不得解的是电泳图上方泳道口的带是什么？有人说是蛋白，但是蛋白也能被EB染色吗？  junye pcr.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有252人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有7人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助TA克隆板子长好多克隆，均是假阳性怎么回事及易错PCR有时候扩不出片段
已经有5人回复
- 菌液PCR的结果显示：阳性克隆较少，且目的条带比较浅
已经有12人回复
- 构建好的质粒转入BL21,卡娜抗性平板转化菌落多，且菌液pcr均为假阳性
已经有1人回复
- TA克隆测序菌落PCR，时隔半年，换了载体试剂盒，还是150bp
已经有16人回复
- 大肠杆菌RED基因敲除4个月总是得不到阳性克隆，求大神指导！！！
已经有2人回复
- x33转化后的阳性克隆鉴定问题
已经有1人回复
- PCR片段连接载体，转化不出阳性克隆，求解?
已经有14人回复
- 感受态转化及阳性克隆出现问题
已经有15人回复
- 关于重组克隆实验中遇到的比较奇怪的问题
已经有17人回复
- TA克隆，假阳性？假阴性？
已经有16人回复
- 蓝白斑筛选过程中的假阳性问题
已经有5人回复
- 请教一下，这是否为假阳性克隆的问题?
已经有1人回复
- 请教一下，这是否为假阳性克隆的问题，如果是，该如何提高阳性克隆效率？
已经有20人回复
- pcambia1300中，使用Kpn与BamH双酶切，后连接一直得不到阳性克隆
已经有1人回复
- 关于TA克隆的摇不出菌的问题
已经有43人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 克隆假阳性的问题
已经有3人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
charles08
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 5788.3
- 散金: 2103
- 红花: 27
- 帖子: 1928
- 在线: 603小时
- 虫号: 823046
- 注册: 2009-08-06
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
4楼2012-11-09 20:38:37
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2012-11-07 14:58:24
3楼2012-11-09 09:02:22
charles08
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 5788.3
- 散金: 2103
- 红花: 27
- 帖子: 1928
- 在线: 603小时
- 虫号: 823046
- 注册: 2009-08-06
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
5楼2012-11-09 20:39:10
