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charles08铁杆木虫 (著名写手)
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假阳性克隆的问题
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最近一直在做克隆，用的载体是TAKARA的PMD18-T， 克隆的DNA片段1100bp左右，为普通TAQ酶（非保真）扩增。 筛选蓝白斑后挑白斑做PCR快速鉴定很久都检测不到阳性结果（如图），然后听取网友建议将94的预变性时间改为10分钟，侥幸得到2个弱弱的条带，然后挑其他白斑重复均得不到有效结果。非常奇怪、原来做这种克隆一个星期以内绝对会出结果，随便挑斑就能出来。现在怎么这么难，挑了10-20个克隆还不能出现阳性。 弱弱问下各位帮忙分析下可能的原因在哪里？ 如果是假阳性问题，那么怎么才能提高转化效率？ 另外，一直不得解的是电泳图上方泳道口的带是什么？有人说是蛋白，但是蛋白也能被EB染色吗？  junye pcr.JPG |
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