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[交流]
大家来说说做southern blot时，基因组DNA的提取方法
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| 做southern blot，对基因组DNA质量要求很高...希望大家一起交流下...我现在用CTAB法提取出来的DNA的质量还行，就是到酶切的时候基本都要切上24小时以上...希望大家多提意见！谢谢！ |
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chenzhu198: 金币+5 2012-11-05 07:52:40
小丹木木: 金币+5, 鼓励交流 2012-11-06 17:28:25
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小丹木木: 金币+5, 鼓励交流 2012-11-06 17:28:25
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DNA抽提缓冲液（lysis buffer）：50mM Tris-Hcl（Ph7.2） 50mM EDTA 3% SDS 1% β-巯基乙醇（用时加） 饱和酚：氯仿（V：V,1：1） 异丙醇 3M醋酸钠NaOAc（Ph8.0） 1． 称取0.075－0.085g干菌丝置于预冷的研钵中，加入液氮研磨至细粉末状，迅速转至1.5ml的离心管中并加入750μl DNA提取缓冲液（65℃预热），在振荡器上振荡几秒钟充分混匀，然后放到65℃水浴锅中水浴60min，每10min摇动一次。 2． 加入750μl饱和酚：氯仿（V：V,1：1）轻轻颠倒离心管数次充分混匀，室温下12000rpm离心15min，取上清液置于新的离心管中。 3． 加入1/30体积的3M醋酸钠NaOAc（PH8.0）和0.54体积的异丙醇，轻轻混匀后置于4℃冰箱中30min，室温下12000rpm离心2min，小心倒掉上清液，然后用冷的70％乙醇洗涤沉淀两次（轻轻颠倒离心管若干次），倒掉乙醇。 4． 将装有DNA沉淀的离心管置于真空干燥器中，干燥约30min（时间以DNA变干为准）。 5． 加入500μl的ddH2O溶解DNA沉淀，同时加入1－2μl RNase（终浓度为20μg/ml）,37水浴60min。 6． 加入等体积的饱和酚：氯仿（V：V,1：1），充分混匀，然后室温下12000rpm离心15min，取上清液置于新的离心管中。 7． 重复步骤3。 8． 重复步骤4。 9． 加入100ml TE溶解DNA，待完全溶解后置于－20℃冰箱中备用。 |
13楼2012-11-04 15:46:14
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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3楼2012-10-31 16:48:13
4楼2012-11-03 13:06:19
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
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