24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

chenzhu198

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 10 (幼儿园)
金币: 9033.4
帖子: 1154
在线: 646.1小时
虫号: 800511

[交流] 大家来说说做southern blot时，基因组DNA的提取方法

做southern blot，对基因组DNA质量要求很高...希望大家一起交流下...我现在用CTAB法提取出来的DNA的质量还行，就是到酶切的时候基本都要切上24小时以上...希望大家多提意见！谢谢！

回复此楼

» 猜你喜欢

NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析已经有0人回复
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有131人回复
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点已经有0人回复
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂已经有0人回复
氢氧化钾活化操作已经有18人回复
散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求southern blot探针设计方法。越详细越好。已经有5人回复
ips细胞的基因组DNA提取出来你们都是怎么保存呢？已经有8人回复
提取基因组DNA发生一件很奇怪的事情已经有21人回复
提取DNA的过程中，怎样做才是无菌操作提取DNA呢？已经有17人回复
细菌基因组DNA抽提用异丙醇沉淀很多已经有5人回复
提取的基因组DNA，拍的图片如下，可以跑pcr么？求帮助已经有11人回复
放线菌DNA提取相关问题已经有6人回复
southern blot 内切酶和探针设计已经有6人回复
求分枝杆菌基因组的提取方法已经有5人回复
DNA各种提取方法及其原理已经有5人回复
样品先用液氮研磨，再称取的话，怎么操作？已经有11人回复
southern blot 确定基因拷贝数原理是什么？已经有4人回复
放线菌DNA 提取不出来，第一次做这方面的，没经验，还望指正已经有19人回复
绿藻植物基因组DNA提取已经有4人回复
天根试剂盒提取，液氮研磨，DNA 提取不出来已经有6人回复
大家说说米糠油提取前景如何已经有12人回复
将目的基因整合到哺乳动物细胞基因组上的方法有哪些？随机or定点？已经有10人回复
说说大家希望本版是什么样子已经有13人回复
基因组DNA提取结果已经有17人回复
用试剂盒植物基因组DNA提取原理已经有4人回复
学校选择，希望大家多提意见已经有20人回复
放线菌基因组DNA提取已经有6人回复
细菌基因组DNA的纯化方法？已经有5人回复

1楼 2012-10-30 22:49:00

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

shucanwei

木虫 (正式写手)

应助: 13 (小学生)
金币: 4809.2
帖子: 464
在线: 72.7小时
虫号: 994653

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chenzhu198: 金币+5 2012-11-05 07:52:40
小丹木木: 金币+5, 鼓励交流 2012-11-06 17:28:25

DNA抽提缓冲液（lysis buffer）：50mM Tris-Hcl（Ph7.2）
                           50mM EDTA
                           3% SDS
                           1% β-巯基乙醇（用时加）
饱和酚：氯仿（V：V,1：1）
异丙醇
3M醋酸钠NaOAc（Ph8.0）

1．称取0.075－0.085g干菌丝置于预冷的研钵中，加入液氮研磨至细粉末状，迅速转至1.5ml的离心管中并加入750μl DNA提取缓冲液（65℃预热），在振荡器上振荡几秒钟充分混匀，然后放到65℃水浴锅中水浴60min，每10min摇动一次。
2．加入750μl饱和酚：氯仿（V：V,1：1）轻轻颠倒离心管数次充分混匀，室温下12000rpm离心15min，取上清液置于新的离心管中。
3．加入1/30体积的3M醋酸钠NaOAc（PH8.0）和0.54体积的异丙醇，轻轻混匀后置于4℃冰箱中30min，室温下12000rpm离心2min，小心倒掉上清液，然后用冷的70％乙醇洗涤沉淀两次（轻轻颠倒离心管若干次），倒掉乙醇。
4．将装有DNA沉淀的离心管置于真空干燥器中，干燥约30min（时间以DNA变干为准）。
5．加入500μl的ddH2O溶解DNA沉淀，同时加入1－2μl RNase（终浓度为20μg/ml）,37水浴60min。
6．加入等体积的饱和酚：氯仿（V：V,1：1），充分混匀，然后室温下12000rpm离心15min，取上清液置于新的离心管中。
7．重复步骤3。
8．重复步骤4。
9．加入100ml TE溶解DNA，待完全溶解后置于－20℃冰箱中备用。