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绿藻植物基因组DNA提取
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| 最近准备提某种藻类植物的基因组DNA，新手上路，请大家推荐下手提用哪些方法好用点？ 还有一个问题，就是如何能够去除色素？ |
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laozuzunzhe: 金币+4, good！ 2013-08-02 11:16:49
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1 取盐藻20 ml，4 000 rps离心3 min，用枪移上清，最后留约1 ml，吹匀后移到1.5 mlEP管内，4 000 rps离心5 min。 2 向沉淀中加入567 μL的TE缓冲掖，用枪吹打使其充分悬浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，该酶在95℃，10 min才失活），30 μL 10％的SDS，37 ℃温育1 h(每15 min混匀一次) 3 加100 μL的5 M的NaCl，用枪混匀，再加80 μL CTAB/NaCl（该试剂在使用前65℃温育使融化，再在室温冷却到30℃使用），混匀，65℃温育10 min。 4 加等体积（约750μL）氯仿/异戊纯（24/1），混匀（轻摇约5 min），12 000rps离心7 min，转上清到新管中。 5 加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），12 000 rpm离心7 min，转上清到新管中。 6 加入0.6体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，静置5 min，12 000 rpm离心5 min，弃上清，用70％乙醇洗涤沉淀两次（12 000 rpm离心1 min）。 7弃上清，放置使乙醇干燥。重溶于30～50μL TE（加RNA酶）中，65℃温育15 min，然后放置-20℃冰箱保存。 注： 1 一般基因组DNA能比质粒放得更久，且-20℃易降解而-80℃不易降解 2 步骤2中细胞悬浮后加入SDS和PK后可以直接颠倒EP管以混匀 3 步骤2后各步骤需要温和操作，防止基因组断裂。 4 CTAB提取液： NaCl 1.4MCTAB（w/v） 2％Tris•Cl 100mMEDTA 20mM巯基乙醇 0.2％ |
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