应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 绿藻植物基因组DNA提取
51/1返回列表
查看: 1847  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lance-tan

金虫 (小有名气)

[求助] 绿藻植物基因组DNA提取

最近准备提某种藻类植物的基因组DNA，新手上路，请大家推荐下手提用哪些方法好用点？  还有一个问题，就是如何能够去除色素？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
新手入门求各位大神指导
1楼 2013-08-01 10:17:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lance-tan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-02 02:24:07
1 取盐藻20 ml，4 000 rps离心3 min，用枪移上清，最后留约1 ml，吹匀后移到1.5 mlEP管内，4 000 rps离心5 min。
2 向沉淀中加入567 μL的TE缓冲掖，用枪吹打使其充分悬浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，该酶在95℃ ...

谢谢了.. 我想问最后一步不加RNA酶影响大不大？
赞一下 回复此楼
新手入门求各位大神指导
5楼2013-08-02 10:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

ecogene_wp

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做过小球藻细胞DNA提取，用的是超声波破碎细胞，然后用传统的酚-氯仿抽提法，效果还不错。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-01 21:44:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lance-tan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ecogene_wp at 2013-08-01 21:44:07
我做过小球藻细胞DNA提取，用的是超声波破碎细胞，然后用传统的酚-氯仿抽提法，效果还不错。

谢谢哈..
回复此楼
新手入门求各位大神指导
3楼2013-08-01 21:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lance-tan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-02 10:44:39
laozuzunzhe: 金币+4, good！ 2013-08-02 11:16:49
1 取盐藻20 ml，4 000 rps离心3 min，用枪移上清，最后留约1 ml，吹匀后移到1.5 mlEP管内，4 000 rps离心5 min。
2 向沉淀中加入567 μL的TE缓冲掖，用枪吹打使其充分悬浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，该酶在95℃，10 min才失活），30 μL 10％的SDS，37 ℃温育1 h(每15 min混匀一次)
3 加100 μL的5 M的NaCl，用枪混匀，再加80 μL CTAB/NaCl（该试剂在使用前65℃温育使融化，再在室温冷却到30℃使用），混匀，65℃温育10 min。
4 加等体积（约750μL）氯仿/异戊纯（24/1），混匀（轻摇约5 min），12 000rps离心7 min，转上清到新管中。
5 加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），12 000 rpm离心7 min，转上清到新管中。
6 加入0.6体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，静置5 min，12 000 rpm离心5 min，弃上清，用70％乙醇洗涤沉淀两次（12 000 rpm离心1 min）。
7弃上清，放置使乙醇干燥。重溶于30～50μL TE（加RNA酶）中，65℃温育15 min，然后放置-20℃冰箱保存。


注：
1 一般基因组DNA能比质粒放得更久，且-20℃易降解而-80℃不易降解
2 步骤2中细胞悬浮后加入SDS和PK后可以直接颠倒EP管以混匀
3 步骤2后各步骤需要温和操作，防止基因组断裂。
4 CTAB提取液： NaCl            1.4MCTAB（w/v）     2％Tris•Cl         100mMEDTA          20mM巯基乙醇        0.2％
赞一下(2人) 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
4楼2013-08-02 02:24:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭