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lance-tan

金虫 (小有名气)

[求助] 绿藻植物基因组DNA提取

最近准备提某种藻类植物的基因组DNA，新手上路，请大家推荐下手提用哪些方法好用点？  还有一个问题，就是如何能够去除色素？
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新手入门求各位大神指导
1楼2013-08-01 10:17:49
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lance-tan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-02 02:24:07
1 取盐藻20 ml，4 000 rps离心3 min，用枪移上清，最后留约1 ml，吹匀后移到1.5 mlEP管内，4 000 rps离心5 min。
2 向沉淀中加入567 μL的TE缓冲掖，用枪吹打使其充分悬浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，该酶在95℃ ...

谢谢了.. 我想问最后一步不加RNA酶影响大不大？
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新手入门求各位大神指导
5楼2013-08-02 10:45:18
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ecogene_wp

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做过小球藻细胞DNA提取，用的是超声波破碎细胞，然后用传统的酚-氯仿抽提法，效果还不错。
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2楼2013-08-01 21:44:07
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lance-tan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ecogene_wp at 2013-08-01 21:44:07
我做过小球藻细胞DNA提取，用的是超声波破碎细胞，然后用传统的酚-氯仿抽提法，效果还不错。

谢谢哈..
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新手入门求各位大神指导
3楼2013-08-01 21:54:29
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lance-tan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-02 10:44:39
laozuzunzhe: 金币+4, good！ 2013-08-02 11:16:49
1 取盐藻20 ml，4 000 rps离心3 min，用枪移上清，最后留约1 ml，吹匀后移到1.5 mlEP管内，4 000 rps离心5 min。
2 向沉淀中加入567 μL的TE缓冲掖，用枪吹打使其充分悬浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，该酶在95℃，10 min才失活），30 μL 10％的SDS，37 ℃温育1 h(每15 min混匀一次)
3 加100 μL的5 M的NaCl，用枪混匀，再加80 μL CTAB/NaCl（该试剂在使用前65℃温育使融化，再在室温冷却到30℃使用），混匀，65℃温育10 min。
4 加等体积（约750μL）氯仿/异戊纯（24/1），混匀（轻摇约5 min），12 000rps离心7 min，转上清到新管中。
5 加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），12 000 rpm离心7 min，转上清到新管中。
6 加入0.6体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，静置5 min，12 000 rpm离心5 min，弃上清，用70％乙醇洗涤沉淀两次（12 000 rpm离心1 min）。
7弃上清，放置使乙醇干燥。重溶于30～50μL TE（加RNA酶）中，65℃温育15 min，然后放置-20℃冰箱保存。


注：
1 一般基因组DNA能比质粒放得更久，且-20℃易降解而-80℃不易降解
2 步骤2中细胞悬浮后加入SDS和PK后可以直接颠倒EP管以混匀
3 步骤2后各步骤需要温和操作，防止基因组断裂。
4 CTAB提取液： NaCl            1.4MCTAB（w/v）     2％Tris•Cl         100mMEDTA          20mM巯基乙醇        0.2％
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互助互励，共奋共进！！
4楼2013-08-02 02:24:07
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