[交流] 大家来说说做southern blot时，基因组DNA的提取方法

3楼: Originally posted by rfengyi at 2012-10-31 16:48:13
偶的还要48h，而且还没酶切完全，都不知道是什么原因，吸一点跑胶检测都没基因组的带了，可是全部点上去跑完发现还有，都不知道怎么办了

6楼: Originally posted by shucanwei at 2012-11-03 19:14:01
我用sds提，完整性很好，我酶切过夜就很弥散。

9楼: Originally posted by 380846776 at 2012-11-03 20:54:47
用sds提，完整性

13楼: Originally posted by shucanwei at 2012-11-04 15:46:14
DNA抽提缓冲液（lysis buffer）：50mM Tris-Hcl（Ph7.2）
                             50mM EDTA
                             3% SDS
                             1% β-巯基乙醇（用时加）
饱和酚：氯仿 ...

15楼: Originally posted by rfengyi at 2012-11-05 14:53:04
我没有用SDS提，用的是CTAB，水浴1h后先用Tris饱和酚抽一次，再用氯仿抽一次，抽完要上清分步加RNaseA Proteinase K，然后再一次酚，一次氯仿，最后异丙醇沉淀。不过沉淀出来的DNA是白色的。...

17楼: Originally posted by rfengyi at 2012-11-06 09:10:52
就跟第一个回帖说的那样，点小量酶切样品跑胶以为都切完全了，可是最后全点上去跑，又能看到一条很弱的基因组的带，实际上也没完全切开。现在打算把酶切体系做大一点试试。...

20楼: Originally posted by dxzhaomiao at 2012-11-06 14:26:43
SDS法原理步骤都差不多，我的方法跟13楼的好像大差不差，但是细节处有不一样的，比如要用50ml离心管，异丙醇沉淀的时候要过滤，还有做southern用的基因组不能加醋酸钠，太具体就记不清了。如果楼主需要，等我下班整 ...

19楼: Originally posted by dxzhaomiao at 2012-11-06 14:21:21
我以前做转基因烟草southern，用的SDS法，基因组提出来挺好的，酶切也很好，但是southern做不出来，做了十几次一直没做出来。你做的是什么植物的？

24楼: Originally posted by czcpudai at 2012-11-06 17:03:50
可以使用试剂盒提取  或者是试剂也可以  想英俊等公司都有买的，国内的好多生物公司也有，其实质量也可以

28楼: Originally posted by rfengyi at 2012-11-08 11:37:06
我也这样提过植物的基因组，不过植物的基因组最后多洗几次，DNA沉淀相对比较透明，测浓度时OD260/280的值1.9左右， 0D260/230的值1.6左右，做酶切时大概两天就能切完全；可是真菌的基因组DNA测的0D260/230才1.1左右 ...

30楼: Originally posted by rfengyi at 2012-11-09 09:11:12
貌似OD230是测盐浓度、EDTA、有机溶剂的，用TE溶一般都会偏低，可是我用纯水溶的，测出来的值也这么低，酒精都洗好几遍了，可是实验还得做，就没管了，要切多久就切多久了，=。就是觉得有点浪费时间。...

33楼: Originally posted by wangxin320 at 2013-05-04 18:15:41
我用的SDS，EDTA，Tris裂解的，然后用酚氯仿进行抽提，提出来效果很好，我100ug的基因组酶切过夜都可以切成弥散

32楼: Originally posted by surgeon_CoA at 2013-05-03 22:40:20
我做微生物的，用的天根的试剂盒，这样可以吗？

36楼: Originally posted by wangxin320 at 2013-05-05 22:01:45
10mM Tris-Cl （pH 8.0），100mM EDTA，0.5%SDS...