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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用试剂盒植物基因组DNA提取原理
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stickforver

银虫 (小有名气)

[求助] 用试剂盒植物基因组DNA提取原理

本人第一次提植物基因组DNA，用的是天根的试剂盒，对于其中的一些具体原理不是很了解，比如各溶液中的有效成分是什么，作用有哪些？希望有经验的各位人士帮忙解答，越详细越好。谢谢！
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Neversaynever.
1楼 2012-12-06 11:03:39
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小虫s

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
stickforver: 金币+2, ★有帮助 2012-12-08 11:56:26
提取液基本都是一些裂解液，大概是CTAB类的东西吧，柱子一般试剂盒都是用硅胶模、阴离子交换树脂。硅胶膜在高盐下结合核酸，在低盐下可以洗脱下来，这样就可以分离获得核酸分子；而阴离子交换树脂则与之相反，在低盐高pH条件下结合核酸，在高盐低pH条件下洗脱
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2楼2012-12-07 21:47:35
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stickforver

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小虫s at 2012-12-07 21:47:35
提取液基本都是一些裂解液，大概是CTAB类的东西吧，柱子一般试剂盒都是用硅胶模、阴离子交换树脂。硅胶膜在高盐下结合核酸，在低盐下可以洗脱下来，这样就可以分离获得核酸分子；而阴离子交换树脂则与之相反，在低盐 ...

查资料，发现通常裂解细胞时用到SDS或CATB，可是将细胞裂解后是依据什么除去蛋白质的。之前做过用试剂盒提质粒，这个过程除去蛋白质的方法好像是通过加入KAC将SDS-Na转变为SDS-K，溶解度降低，析出沉淀，此时基因组DNA因为分子量大，连同蛋白一起沉淀，而质粒较小不沉淀。那么在提植物标基因组DNA时我们要的是分子量大的基因组DNA，要怎么保证即除去蛋白质又能保留住基因组DNA？还有在提基因组DNA时分子量相对较小的叶绿体DNA和线粒体DNA会被提出来吗？在查资料时还发现，在提基因组DNA时（不是用试剂盒）有一种方法是加入蛋白酶K用来出除去蛋白质,可是体系中有SDS，蛋白酶K怎么能保持活性呢？现在脑袋很晕，理不清思路，希望大家帮忙理理。。。
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Neversaynever.
3楼2012-12-08 12:15:59
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小虫s

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by stickforver at 2012-12-08 12:15:59
查资料，发现通常裂解细胞时用到SDS或CATB，可是将细胞裂解后是依据什么除去蛋白质的。之前做过用试剂盒提质粒，这个过程除去蛋白质的方法好像是通过加入KAC将SDS-Na转变为SDS-K，溶解度降低，析出沉淀，此时基因组 ...

对植物DNA提取时候，液氮研磨，破碎组织细胞，加入裂解液，进行裂解，裂解后，也要经过酚氯仿进行抽提的，去除蛋白类的东西，然后上柱子，相对较小的线粒体和叶绿体DNA也会被提出来的。蛋白酶K不是一定要加的，我做的时候基本不加，至于是否会保持活性，这个我就不太清楚了
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4楼2012-12-09 09:46:56
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stickforver

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小虫s at 2012-12-09 09:46:56
对植物DNA提取时候，液氮研磨，破碎组织细胞，加入裂解液，进行裂解，裂解后，也要经过酚氯仿进行抽提的，去除蛋白类的东西，然后上柱子，相对较小的线粒体和叶绿体DNA也会被提出来的。蛋白酶K不是一定要加的，我做 ...

谢谢！经过好些天折腾，对基因组DNA的提取有了最基本的了解。对于蛋白酶K还是没搞清楚，百度上说蛋白酶K在SDS中是可以稳定的，具体为什么没说，希望有一天能突然看到相关解释。
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Neversaynever.
5楼2012-12-10 20:37:24
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