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stickforver

银虫 (小有名气)

[求助] 用试剂盒植物基因组DNA提取原理

本人第一次提植物基因组DNA,用的是天根的试剂盒,对于其中的一些具体原理不是很了解,比如各溶液中的有效成分是什么,作用有哪些?希望有经验的各位人士帮忙解答,越详细越好。谢谢!
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Neversaynever.
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小虫s

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
stickforver: 金币+2, ★有帮助 2012-12-08 11:56:26
提取液基本都是一些裂解液,大概是CTAB类的东西吧,柱子一般试剂盒都是用硅胶模、阴离子交换树脂。硅胶膜在高盐下结合核酸,在低盐下可以洗脱下来,这样就可以分离获得核酸分子;而阴离子交换树脂则与之相反,在低盐高pH条件下结合核酸,在高盐低pH条件下洗脱
2楼2012-12-07 21:47:35
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stickforver

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小虫s at 2012-12-07 21:47:35
提取液基本都是一些裂解液,大概是CTAB类的东西吧,柱子一般试剂盒都是用硅胶模、阴离子交换树脂。硅胶膜在高盐下结合核酸,在低盐下可以洗脱下来,这样就可以分离获得核酸分子;而阴离子交换树脂则与之相反,在低盐 ...

查资料,发现通常裂解细胞时用到SDS或CATB,可是将细胞裂解后是依据什么除去蛋白质的。之前做过用试剂盒提质粒,这个过程除去蛋白质的方法好像是通过加入KAC将SDS-Na转变为SDS-K,溶解度降低,析出沉淀,此时基因组DNA因为分子量大,连同蛋白一起沉淀,而质粒较小不沉淀。那么在提植物标基因组DNA时我们要的是分子量大的基因组DNA,要怎么保证即除去蛋白质又能保留住基因组DNA?还有在提基因组DNA时分子量相对较小的叶绿体DNA和线粒体DNA会被提出来吗?在查资料时还发现,在提基因组DNA时(不是用试剂盒)有一种方法是加入蛋白酶K用来出除去蛋白质,可是体系中有SDS,蛋白酶K怎么能保持活性呢?现在脑袋很晕,理不清思路,希望大家帮忙理理。。。
Neversaynever.
3楼2012-12-08 12:15:59
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小虫s

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stickforver at 2012-12-08 12:15:59
查资料,发现通常裂解细胞时用到SDS或CATB,可是将细胞裂解后是依据什么除去蛋白质的。之前做过用试剂盒提质粒,这个过程除去蛋白质的方法好像是通过加入KAC将SDS-Na转变为SDS-K,溶解度降低,析出沉淀,此时基因组 ...

对植物DNA提取时候,液氮研磨,破碎组织细胞,加入裂解液,进行裂解,裂解后,也要经过酚氯仿进行抽提的,去除蛋白类的东西,然后上柱子,相对较小的线粒体和叶绿体DNA也会被提出来的。蛋白酶K不是一定要加的,我做的时候基本不加,至于是否会保持活性,这个我就不太清楚了
4楼2012-12-09 09:46:56
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stickforver

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小虫s at 2012-12-09 09:46:56
对植物DNA提取时候,液氮研磨,破碎组织细胞,加入裂解液,进行裂解,裂解后,也要经过酚氯仿进行抽提的,去除蛋白类的东西,然后上柱子,相对较小的线粒体和叶绿体DNA也会被提出来的。蛋白酶K不是一定要加的,我做 ...

谢谢!经过好些天折腾,对基因组DNA的提取有了最基本的了解。对于蛋白酶K还是没搞清楚,百度上说蛋白酶K在SDS中是可以稳定的,具体为什么没说,希望有一天能突然看到相关解释。
Neversaynever.
5楼2012-12-10 20:37:24
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