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weining1203

新虫 (小有名气)

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[求助] 最近做的菌落pcr，可以做胶回收吗？已有1人参与

如标题，最近跑的菌落pcr，1-3有拖尾和弥散，但是目的带很亮，产生这种现象的原因是什么啊，杂质比较多吗；4和5的模板是DNA，不是菌落，目的带比较弱，小弟想问一下1-3可不可做胶回收然后连T载体做克隆啊，还要优化pcr条件吗？

eric 2012-09-25 21hr 01min1.jpg

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1楼 2012-09-26 09:35:38

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

引用回帖:

7楼: Originally posted by weining1203 at 2012-09-26 10:32:46
谢谢！现在重新设计了一条带酶切位点的引物做的pcr，让目的基因两边加上酶切位点，然后做原核表达！之前菌里面的目的基因没有酶切位点！请问mini-prep是什么，本人是新手，不懂啊，恳求指点...

你的目的基因不在克隆载体里面吗？对不起我之前不知道。我以为你是用菌落PCR筛选阳性克隆。现在用引物引入酶切位点是比较常用的克隆方法。mini-prep是用试剂盒小规模纯化质粒。