| 查看: 2026 | 回复: 15 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
[交流]
表达蛋白折叠不正确会有活性麽？
|
||||
|
如题，37℃，1mMIPTG，6h，表达细胞超声波破碎后，离心，SDS-PAGE显示，上清跟沉淀都有目的蛋白，但是沉淀明显更多，测定了上清酶活（底物为海藻酸钠），有活性，但是做纯化的时候悲剧了，死活挂不上柱子，蛋白都在流川液中. 有朋友说，试试低温诱导，减少包涵体，这里我有几个疑问 1：我上清中明显是有目的蛋白的，也有酶活，为何挂不上柱子，莫非是诱导温度过高，翻译过快，把GST折叠进去了，所以挂不上，但是这样的话，蛋白岂不是也没有活性的？可事实是有的…… 2：有表达有酶活是否等于折叠正确？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有149人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复- 关于纯化蛋白活性的问题~我把蛋白放在-20°会失火吗
已经有7人回复
- 如何提取有活性的蛋白质？
已经有3人回复
- β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性
已经有24人回复
- 求帮忙理解一下这句话的意思 有关蛋白折叠的
已经有1人回复
- 【资料下载】有关蛋白质折叠的几篇文献资料^_^
已经有19人回复
- 毕赤酵母表达出蛋白但没有活性
已经有18人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？
已经有20人回复
- 【求助/交流】求助变性的P53蛋白折叠复性困难吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】原核表达 诱导时间的长短影不影响蛋白的活性啊？
已经有6人回复
- 【求助/交流】老婆实验表达的真核蛋白没有活性，无比郁闷，祈求建议和祝福
已经有42人回复
- 【求助/交流】蛋白质提取以后应如何存放才能保证活性不变啊
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌表达的目的蛋白没活性，可以考虑换什么表达载体？
已经有7人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
中国科学技术大学 精准智能化学重点实验室 武建昌课题组招聘博士后
+1/83
-
招收26年资源与环境领域、生物质生物转化、生物技术等方向博士研究生
+1/81
-
大叔征婚
+1/59
-
医学检验方向招收申请考核博士研究生
+2/38
-
上海交通大学智能颗粒流体团队 招收工程AI计算方向科研助理、博士生及博士后
+1/32
-
招收2026年生物类博士
+1/32
-
宁波大学张天宇教授课题组招聘副教授/讲师
+1/29
-
华北电力大学（北京）（第一性原理计算）博士招生——学博，专博各1人
+2/28
-
浙大城市学院向铮教授与浙江大学联合招聘博后
+1/27
-
中山大学院士团队王来源教授课题组招聘博士后
+2/20
-
东华大学 唐正 课题组诚招2026年博士研究生-有机半导体材料与器件等
+1/9
-
湖南大学2026博士招生
+1/8
-
长江大学武汉校区诚招新能源博士（工程热物理、电气、油气）-2025
+1/8
-
伦敦大学学院（University College London）机械工程系博士招生/CSC联培招生
+1/7
-
香港城市大学 Microsystems and Semiconductor Technology Lab 博士生招生启事
+1/6
-
福建师范大学 国家级人才团队 电池回收方向 招收2026年入学博士
+1/5
-
海南大学生物医学工程学院光免疫诊疗团队诚招神经生物学、光学、分子生物学博士
+1/5
-
长江大学武汉校区诚招工程热物理、油气、电气等新能源博士-2025
+1/5
-
南开大学齐迹课题组诚聘博士后
+1/4
-
东莞理工学院-大连化物所联合招聘光催化方向博士后2名（年薪48W）
+1/2
★ ★ ★ ★ ★ ★
Marado(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, 热心的虫虫 2012-09-20 15:36:38
Marado(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, 热心的虫虫 2012-09-20 15:36:38
|
GST标签本身就是比较特殊的，表达时候容易形成标签的二聚体，而标签的二聚体是不挂柱的。所以，能用his就用his。 还有就是你说的，可能是温度高了，来不及正确折叠，就把标签给包裹了。 不知道你有没有酶切位点，酶切之后看看还有没有活性。 酶活和折叠正确与否关系不大，因为每个蛋白或者酶都有一个活性中心，只要这个活性中心没变性，那么酶或者蛋白还是能起作用的。 比如说，肠激酶是两个亚基组成，其实起作用的只是那个轻链。 希望能帮上。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
Marado2楼2012-09-20 11:09:19
3楼2012-09-20 12:10:17
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极解答问题 2012-09-20 15:37:07
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极解答问题 2012-09-20 15:37:07
|
至于二聚体的形成，这好像和你用的质粒还有宿主有关系，涉及基因调控表达方面的了，怎么减少我没具体方案。不过，既然是表达过程形成的，我们可以降低宿主的表达速度，使蛋白有条不紊的折叠，我觉得就能降低二聚体的形成。 降低温度肯定是要的，IPTG浓度能用低的就不要高的。 酶切是看你在标签和蛋白之间有没有设计相应的酶切位点。比如说TEV，EK之类的特异性位点。 我之前说的酶切是让你检验一下你的标签有没有被包裹，酶切之后会不会影响活性。 |
4楼2012-09-20 12:41:24
5楼2012-09-20 12:47:29
6楼2012-09-20 13:24:33
7楼2012-09-20 14:39:45
8楼2012-09-20 15:10:45
9楼2012-09-20 15:25:32
10楼2012-09-20 15:40:15
借你吉言了……第一次做表达，做了4个月了，一路磕磕绊绊，心力憔悴，好容易到最后一步纯化了……又遇到槛了……11楼2012-09-20 16:10:57
加油啊，人家CSH做一个蛋白不也用了18个月。出来就好，过程很好的，学到东西多。12楼2012-09-20 16:20:31
13楼2012-09-20 16:32:24
14楼2012-09-20 16:38:32
15楼2012-09-22 11:48:35
16楼2012-09-22 13:50:02