| 查看: 2171 | 回复: 15 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
表达蛋白折叠不正确会有活性麽？
|
||||
|
如题，37℃，1mMIPTG，6h，表达细胞超声波破碎后，离心，SDS-PAGE显示，上清跟沉淀都有目的蛋白，但是沉淀明显更多，测定了上清酶活（底物为海藻酸钠），有活性，但是做纯化的时候悲剧了，死活挂不上柱子，蛋白都在流川液中. 有朋友说，试试低温诱导，减少包涵体，这里我有几个疑问 1：我上清中明显是有目的蛋白的，也有酶活，为何挂不上柱子，莫非是诱导温度过高，翻译过快，把GST折叠进去了，所以挂不上，但是这样的话，蛋白岂不是也没有活性的？可事实是有的…… 2：有表达有酶活是否等于折叠正确？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有63人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 关于纯化蛋白活性的问题~我把蛋白放在-20°会失火吗
已经有7人回复
- 如何提取有活性的蛋白质？
已经有3人回复
- β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性
已经有24人回复
- 求帮忙理解一下这句话的意思 有关蛋白折叠的
已经有1人回复
- 【资料下载】有关蛋白质折叠的几篇文献资料^_^
已经有19人回复
- 毕赤酵母表达出蛋白但没有活性
已经有18人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？
已经有20人回复
- 【求助/交流】求助变性的P53蛋白折叠复性困难吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】原核表达 诱导时间的长短影不影响蛋白的活性啊？
已经有6人回复
- 【求助/交流】老婆实验表达的真核蛋白没有活性，无比郁闷，祈求建议和祝福
已经有42人回复
- 【求助/交流】蛋白质提取以后应如何存放才能保证活性不变啊
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌表达的目的蛋白没活性，可以考虑换什么表达载体？
已经有7人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
坐标广州，征女友
+2/200
-
西南科技大学曹克课题组招收2026级申请考核制有机化学博士研究生
+1/180
-
香港岭南大学郭瑛课题组博士招生 (2026年秋季入学）
+1/176
-
诚招化工、有机、高分子等领域博士后及科研助理
+2/118
-
香港科技大学（广州）黄加强课题组智能电池方向博士招聘
+1/84
-
中国科学院深圳先进技术研究院——招聘博士后
+3/83
-
欢迎报考南京农业大学植物环境适应课题组课题组2026级博士生。
+1/83
-
好玩的不敢搞，能搞的不挣钱，能挣钱的我不会做
+1/82
-
中国海洋大学与中国水产科学研究院 联合培养 专硕 食品加工与安全
+1/74
-
湘潭大学“过程强化与绿色化工”创新团队补招2026年秋入学博士生
+2/58
-
操作求助
+1/33
-
西安交通大学前沿院/机械学院招收2026级硕博研究生！
+1/29
-
中国科学技术大学环境系招生
+1/20
-
招收中国CSC或学校资助联培博士生/访问学生-- Tsinghua-A*STAR 2025 Joint Funding
+1/10
-
哈工大 张乃庆课题组招收博士快响计划（名额充足），通过后随时入学
+1/8
-
中国科学院深圳先进技术研究院——招聘客座研究生
+3/4
-
澳科大招收2026年秋季入学生物材料方向全奖博士研究生（3月5日截止）
+1/4
-
江汉大学轩亮教授课题组招博士研究生/博士后
+1/4
-
澳科大招收2026年秋季入学药剂学/生物材料方向全奖博士研究生
+1/2
-
Advanced Science审稿周期一般要多久
+1/1
14楼2012-09-20 16:38:32
★ ★ ★ ★ ★ ★
Marado(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, 热心的虫虫 2012-09-20 15:36:38
Marado(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, 热心的虫虫 2012-09-20 15:36:38
|
GST标签本身就是比较特殊的，表达时候容易形成标签的二聚体，而标签的二聚体是不挂柱的。所以，能用his就用his。 还有就是你说的，可能是温度高了，来不及正确折叠，就把标签给包裹了。 不知道你有没有酶切位点，酶切之后看看还有没有活性。 酶活和折叠正确与否关系不大，因为每个蛋白或者酶都有一个活性中心，只要这个活性中心没变性，那么酶或者蛋白还是能起作用的。 比如说，肠激酶是两个亚基组成，其实起作用的只是那个轻链。 希望能帮上。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
Marado2楼2012-09-20 11:09:19
3楼2012-09-20 12:10:17
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极解答问题 2012-09-20 15:37:07
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极解答问题 2012-09-20 15:37:07
|
至于二聚体的形成，这好像和你用的质粒还有宿主有关系，涉及基因调控表达方面的了，怎么减少我没具体方案。不过，既然是表达过程形成的，我们可以降低宿主的表达速度，使蛋白有条不紊的折叠，我觉得就能降低二聚体的形成。 降低温度肯定是要的，IPTG浓度能用低的就不要高的。 酶切是看你在标签和蛋白之间有没有设计相应的酶切位点。比如说TEV，EK之类的特异性位点。 我之前说的酶切是让你检验一下你的标签有没有被包裹，酶切之后会不会影响活性。 |
4楼2012-09-20 12:41:24
