| 查看: 2980 | 回复: 15 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
表达蛋白折叠不正确会有活性麽？
|
||||
|
如题，37℃，1mMIPTG，6h，表达细胞超声波破碎后，离心，SDS-PAGE显示，上清跟沉淀都有目的蛋白，但是沉淀明显更多，测定了上清酶活（底物为海藻酸钠），有活性，但是做纯化的时候悲剧了，死活挂不上柱子，蛋白都在流川液中. 有朋友说，试试低温诱导，减少包涵体，这里我有几个疑问 1：我上清中明显是有目的蛋白的，也有酶活，为何挂不上柱子，莫非是诱导温度过高，翻译过快，把GST折叠进去了，所以挂不上，但是这样的话，蛋白岂不是也没有活性的？可事实是有的…… 2：有表达有酶活是否等于折叠正确？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有169人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 关于纯化蛋白活性的问题~我把蛋白放在-20°会失火吗
已经有7人回复
- 如何提取有活性的蛋白质？
已经有3人回复
- β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性
已经有24人回复
- 求帮忙理解一下这句话的意思 有关蛋白折叠的
已经有1人回复
- 【资料下载】有关蛋白质折叠的几篇文献资料^_^
已经有19人回复
- 毕赤酵母表达出蛋白但没有活性
已经有18人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？
已经有20人回复
- 【求助/交流】求助变性的P53蛋白折叠复性困难吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】原核表达 诱导时间的长短影不影响蛋白的活性啊？
已经有6人回复
- 【求助/交流】老婆实验表达的真核蛋白没有活性，无比郁闷，祈求建议和祝福
已经有42人回复
- 【求助/交流】蛋白质提取以后应如何存放才能保证活性不变啊
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌表达的目的蛋白没活性，可以考虑换什么表达载体？
已经有7人回复
送鲜花一朵 
3楼2012-09-20 12:10:17
★ ★ ★ ★ ★ ★
Marado(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, 热心的虫虫 2012-09-20 15:36:38
Marado(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, 热心的虫虫 2012-09-20 15:36:38
|
GST标签本身就是比较特殊的，表达时候容易形成标签的二聚体，而标签的二聚体是不挂柱的。所以，能用his就用his。 还有就是你说的，可能是温度高了，来不及正确折叠，就把标签给包裹了。 不知道你有没有酶切位点，酶切之后看看还有没有活性。 酶活和折叠正确与否关系不大，因为每个蛋白或者酶都有一个活性中心，只要这个活性中心没变性，那么酶或者蛋白还是能起作用的。 比如说，肠激酶是两个亚基组成，其实起作用的只是那个轻链。 希望能帮上。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2012-09-20 11:09:19
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极解答问题 2012-09-20 15:37:07
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极解答问题 2012-09-20 15:37:07
|
至于二聚体的形成，这好像和你用的质粒还有宿主有关系，涉及基因调控表达方面的了，怎么减少我没具体方案。不过，既然是表达过程形成的，我们可以降低宿主的表达速度，使蛋白有条不紊的折叠，我觉得就能降低二聚体的形成。 降低温度肯定是要的，IPTG浓度能用低的就不要高的。 酶切是看你在标签和蛋白之间有没有设计相应的酶切位点。比如说TEV，EK之类的特异性位点。 我之前说的酶切是让你检验一下你的标签有没有被包裹，酶切之后会不会影响活性。 |
4楼2012-09-20 12:41:24
5楼2012-09-20 12:47:29
