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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 克隆出问题了,大家帮忙分析下 已有11人参与

这个基因需要做蛋白表达。6月份已经诱导表达出来了,但是菌液忘记保种了。只得重新从头做。但现在克隆出来的片段大小可以,连接转化测序后,片段的顺序却是错的,中间总是少了一段,该是那个环节出问题了呢?PCR扩增就不成功,还是连接转化的问题?重复了两次都是这种情况。该怎么办呢?请大家指点下,谢谢。
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Things change, people grow.
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here0009

银虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果少一段,我觉得可能是PCR的问题吧,扩出来就那样,可能是splice variation
Forthemoon
3楼2012-09-11 16:07:56
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dshlove

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你没有留连接好的质粒嘛?
你这种情况就是模板的问题的,不知道你现在用的是什么模板。
2楼2012-09-11 12:45:29
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-11 12:45:29
你没有留连接好的质粒嘛?
你这种情况就是模板的问题的,不知道你现在用的是什么模板。

是7月份提的RNA,然后反转录为cDNA,RNA电泳检测还不错。模板一直放在-20°。
Things change, people grow.
4楼2012-09-12 16:03:16
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by here0009 at 2012-09-11 16:07:56
如果少一段,我觉得可能是PCR的问题吧,扩出来就那样,可能是splice variation

这样的话能表达吗?
Things change, people grow.
5楼2012-09-12 16:03:31
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