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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做克隆，大家帮忙估算一下摇菌时间
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mengxibio

新虫 (小有名气)

[交流] 做克隆，大家帮忙估算一下摇菌时间 已有5人参与

情况是这样的，这批感受态细胞活性似乎有点低。
前几天做克隆，摇菌1h后涂板，发现培养了24小时也没出菌落。老板怀疑感受态细胞有问题，让我用感受态细胞原液做了个四区划线培养看看。
平板培养了几乎24h，才看到1区出现一些菌落，2,3,4都还未长。

那么我再次做摇菌时间应该延长至多少呢？
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1楼 2011-08-12 10:05:45
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
西瓜(金币+1): 很有经验 2011-08-12 18:12:03
1.5h吧，不要太长了，不然假阳性太高。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-12 10:40:04
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
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西瓜(金币+1): 赞成！ 2011-08-12 18:12:11
明知道感受态细胞质量不好干吗还非得用呢，为什么不换新的呢？
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-08-12 10:57:17
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peace12039088

银虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-12 18:12:21
还是换感受态吧
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4楼2011-08-12 11:01:52
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 是的 支持 2011-08-12 19:39:34
换感受态啦，24小时才长一点，都可能是杂菌了。到时候做转化，抗生素十多个小时就失活了，你摇上一天，背景、污染什么的都长出来了。这批感受态最好不要用了。
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5楼2011-08-12 13:55:16
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xbl3688

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-12 19:40:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-08-12 13:55:16:
换感受态啦，24小时才长一点，都可能是杂菌了。到时候做转化，抗生素十多个小时就失活了，你摇上一天，背景、污染什么的都长出来了。这批感受态最好不要用了。

用这样的感受态小心翼翼的做了两三天还不一定挑得到，真的可以考虑换感受态，别的实验室借一借。有个问题想问五楼： “抗生素十多个小时就失活了”是不是意味着我涂抗性平板，第一天没长，第二天甚至第三天才长的很可能是杂菌了呀？？
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
6楼2011-08-12 15:05:39
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone: 有的不是很容易失效的 不过你的处理是保险起见 2011-08-12 19:40:31
引用回帖:
6楼: Originally posted by xbl3688 at 2011-08-12 15:05:39:
用这样的感受态小心翼翼的做了两三天还不一定挑得到，真的可以考虑换感受态，别的实验室借一借。有个问题想问五楼： “抗生素十多个小时就失活了”是不是意味着我涂抗性平板，第一天没长，第二天甚至第三天才长的 ...

嗯，就是这个意思。不但是涂板，液体培养基里面加抗生素也是这个情况。我有过亲身经历：摇两管菌（加Amp），过夜，一管长了，一管没长，没长的那管继续摇到中午（~16h）。后面提质粒，中午才长起来的那管没有。
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7楼2011-08-12 15:46:20
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xbl3688

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-08-12 15:46:20:
嗯，就是这个意思。不但是涂板，液体培养基里面加抗生素也是这个情况。我有过亲身经历：摇两管菌（加Amp），过夜，一管长了，一管没长，没长的那管继续摇到中午（~16h）。后面提质粒，中午才长起来的那管没有。

多谢
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
8楼2011-08-13 15:57:14
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