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weiyasong木虫 (著名写手)
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大家好，帮忙看看PCR结果吧？谢谢！！！
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大家好，昨天跑的PCR结果： 1、第3条带大约是多少啊？ 2、第4条带的目的片段是187bp，有目的条带，但不是太清楚，而且引物很亮，这是怎么回事啊？PCR反应程序是94℃4min，94℃30s-56℃45s-72℃30s---30个循环，72℃5min 还请高人指教，小弟将不胜感激！谢谢！！！  112.jpg |
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weiyasong
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3楼2012-09-10 21:53:12
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2楼2012-09-10 21:46:59
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对于问题一：建议参照marker条带位置（看一下marker的说明书，应该会有对应的每条带长度说明的），以及你设计时候的预期扩增片段长度，结合起来可以估计出第三条带的大小。 对于问题二：应该是你扩增的条件设置不够理想，导致引物二聚体严重。建议提高退火问题，或者是用touchdown（二阶段温度法）的方法（对于上下游引物TM值相差较大的情况）重新扩增，扩增结果应该会有改善。 |
4楼2012-09-10 22:02:33
weiyasong
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5楼2012-09-10 22:08:38
