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XUMIN6891金虫 (初入文坛)
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[求助]
毕赤酵母表达一直不表达已有2人参与
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| 大家好，我是一个做酵母表达的初学者，我现在做了好久了结果一直没表达，现叙述过程如下：我用PCR鉴定正确已成功整合到酵母基因组的菌落进行表达，我先用YPDS培养基摇正确的菌落大致摇23h左右，然后按1%的比例接种到25ml BMGY培养基中的，然后摇24h左右OD值大致是2.7-2.8之间，我用4000r离心10分钟，弃上清，然后用我预先配好的100ml BMMY培养基其中的一部分把上述菌体先悬浮，然后全部加到BMMY培养基中开始诱导表达，按1%的补加甲醇量每24h补加一次，每24h取一次样，前2天我是每次取1ml，到96h-168h我都是取得10ml，然后我用TCA方法进行浓缩的，我是做个梯度分别用的是1ml，3ml，5ml上清来进行浓缩的，然后最后加到上样量用SDS-PAGE法进行鉴定，我的蛋白大小时15KD左右，用的是考马斯亮蓝染色法然后进行脱色，结果条带还是几乎跟看不到似的，哪位高手指导一下我哪步需要改进，哪步做的有问题吗？不甚感谢哦！ |
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 【分子生物】EPI帖 | 酵母表达纯化一站式解决！ | 蛋白表达纯化鉴定精华 |
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爨乡主人
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12楼2014-10-27 20:15:18