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dshlove

木虫 (正式写手)

MolEPI: 17
应助: 237 (大学生)
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红花: 10
帖子: 852
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虫号: 1609389
注册: 2012-02-10
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专业: 污染控制化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 几个帖子一起给予EPI，谢谢对分子版的支持 2012-09-06 13:49:31

引用回帖:

5楼: Originally posted by XUMIN6891 at 2012-09-06 09:42:21
是的，我觉得我电转化效率低的原因可能与电转仪有很大关系，虽然少但是长出的菌落进行鉴定也都是正确的也都整合到酵母基因组当中了啊，像你们一般筛选30多个，如果这30多个鉴定都正确的话，你都进行表达了啊？应该 ...

我们筛选30个，但是最终鉴定正确的却不多哦，当然也分批次去表达测试。一次弄不过来这么多，不像是大肠杆菌啊。
我觉得上清的量是次要因素，主要是你的蛋白浓度决定的。
我们一般是用硫酸铵沉淀，不过硫酸铵沉淀要求蛋白浓度是1mg/ml,但是硫酸铵在蛋白的稳定性方面还是很好的。看你的蛋白像是降解了，若蛋白浓度不高此方法仅供参考。
如果你的蛋白浓度低的话，我给一种方法，参考下：
以1ml上清为例，1ml上清加0.1ml 0.15%DOC，
室温放置10min，
在加入50ul 100%TCA。
这种方法适合蛋白浓度小于1ug/ml的低浓度情况下，注意，不要有SDS哦。
希望能帮上。