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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 学术交流区 » 论文投稿 » 其他 » western blot 显色6组里边只有一组有条带，急，求助！谢谢！
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lixuem2012

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 显色6组里边只有一组有条带，急，求助！谢谢！

做蛋白免疫印迹，一共6组，除样品外，其他操作完全一致，为什么每次显色只有一组能显出，并且很亮；其他却没有，显不出来。怀疑过蛋白降解，电泳后考染，结果显示各组条带分部一致，说明并没有降解。实在搞不清楚原因，请各位高手指点。比较着急，又懂的请告知一下，我应该怎么做呢？或者怎么来继续验证？？谢谢!!
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1楼 2012-08-27 10:11:56
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lixuem2012

新虫 (初入文坛)
换了种抗体，做是做出来了，只是有的组条带很浅。二抗再次孵育后，背景一片黑，看来不能重复做，这几天忙别的就给搁置了。依旧没搞清楚，这个抗体别人用着很好，没啥问题，我的样品却不行……后边再做做看吧，谢谢各位O(∩_∩)O~
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5楼2012-09-03 20:31:13
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lixuem2012

新虫 (初入文坛)
补充：做的内参β-actin，反反复复做过好多次了，最多时候显示出3组有条带。后来重新变性的样品，现在只有一组能显出来。步骤什么应该不是问题，同学做其他样品的，同样条件可以做出来。我这个的问题不是做不出来，而是6组只有1组能显出，那其他的到底怎么回事呢？？？？纠结的实验……
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2楼2012-08-27 10:31:22
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CellZe

金虫 (小有名气)
是不是一抗的问题？
一抗失效或者是浓度过低什么的
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天道酬勤
3楼2012-08-30 09:23:59
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thaibin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lixuem2012: 金币+5, ★有帮助 2012-09-03 20:31:53
actin应该很好出啊。  
1. 转膜后厉春红染膜看一下，转膜有没有问题
2.杂抗体 洗膜等过程， 膜是分开做的 还是叠在一起了？
3.ECL是否作用均匀
4.延长曝光时间 是否有条带
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Dreamit!Beit!
4楼2012-08-30 10:25:29
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