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lixuem2012

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot 显色6组里边只有一组有条带,急,求助!谢谢!

做蛋白免疫印迹,一共6组,除样品外,其他操作完全一致,为什么每次显色只有一组能显出,并且很亮;其他却没有,显不出来。怀疑过蛋白降解,电泳后考染,结果显示各组条带分部一致,说明并没有降解。实在搞不清楚原因,请各位高手指点。比较着急,又懂的请告知一下,我应该怎么做呢?或者怎么来继续验证??谢谢!!
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CellZe

金虫 (小有名气)

是不是一抗的问题?
一抗失效或者是浓度过低什么的
天道酬勤
3楼2012-08-30 09:23:59
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lixuem2012

新虫 (初入文坛)

补充:做的内参β-actin,反反复复做过好多次了,最多时候显示出3组有条带。后来重新变性的样品,现在只有一组能显出来。步骤什么应该不是问题,同学做其他样品的,同样条件可以做出来。我这个的问题不是做不出来,而是6组只有1组能显出,那其他的到底怎么回事呢????纠结的实验……
2楼2012-08-27 10:31:22
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thaibin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lixuem2012: 金币+5, 有帮助 2012-09-03 20:31:53
actin应该很好出啊。  
1. 转膜后厉春红染膜看一下,转膜有没有问题
2.杂抗体 洗膜等过程, 膜是分开做的 还是叠在一起了?
3.ECL是否作用均匀
4.延长曝光时间 是否有条带
Dreamit!Beit!
4楼2012-08-30 10:25:29
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lixuem2012

新虫 (初入文坛)

换了种抗体,做是做出来了,只是有的组条带很浅。二抗再次孵育后,背景一片黑,看来不能重复做,这几天忙别的就给搁置了。依旧没搞清楚,这个抗体别人用着很好,没啥问题,我的样品却不行……后边再做做看吧,谢谢各位O(∩_∩)O~
5楼2012-09-03 20:31:13
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